一、ELISA的原理
ELISA的根底是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶符號。結(jié)合在固相載體外表的抗原或抗體仍堅(jiān)持其免疫學(xué)活性，酶符號的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測守時(shí)，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體外表的抗原或抗體起反響。用洗刷的辦法使固相載體上構(gòu)成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分隔。再加入酶符號的抗原或抗體，也經(jīng)過反響而結(jié)合在固相載體上。此刻固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的份額。加入酶反響的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)品，產(chǎn)品的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可依據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。因?yàn)槊傅拇呋β屎芨?，間接地?cái)U(kuò)大了免疫反響的結(jié)果，使測定辦法達(dá)到很高的敏感度。
 

二、ELISA的類型
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定辦法中有三個(gè)必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶符號的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；（3）酶反響的底物。依據(jù)試劑的來歷和標(biāo)本的狀況以及檢測的具體條件，可規(guī)劃出各種不同類型的檢測辦法。用于臨床查驗(yàn)的ELISA主要有以下幾種類型：
 

1.雙抗體夾心法測抗原
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的辦法，操作過程如下：
1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)合，構(gòu)成固相抗體。洗刷除掉未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2）加受檢標(biāo)本，保溫反響。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，構(gòu)成固相抗原抗體復(fù)合物。洗刷除掉其他未結(jié)合物質(zhì)。
3）加酶標(biāo)抗體，保溫反響。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗刷未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此刻固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)品。經(jīng)過比色，測知標(biāo)本中抗原的量。
 

2.雙抗原夾心法測抗體
反響形式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測定，因而其敏感度相對高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測常選用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)依據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找適宜的符號辦法。
 

3.間接法測抗體
間接法是檢測抗體常用的辦法。其原理為使用酶符號的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體。
 

4.競賽法測抗體
當(dāng)抗原材猜中的攪擾物質(zhì)不易除掉，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競賽與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，因而陽性反響呈色淺于陰性反響。如抗原為高純度的，可直接包被固相。

如抗原中會有攪擾物質(zhì)，直接包被不易成功，可選用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體，然后加入抗原，構(gòu)成固相抗原。洗刷除掉抗原中的雜質(zhì)，然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競賽結(jié)合反響。競賽法測抗體有多種形式，可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競賽結(jié)合，抗HBc ELISA一般選用此法。另一種形式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競賽結(jié)合，洗刷后再加入酶標(biāo)抗體，與結(jié)合在固相上的抗原反響?？笻Be的檢測一般選用此法。
 

5.競賽法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因而不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，能夠選用競賽法形式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競賽與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
 

6.捕獲包被法測抗體
IgM抗體的檢測用于流行癥的前期確診中。間接法ELISA一般僅適用于檢測總抗體或IgG抗體。如用抗原包被的間接法直接測定IgM抗體，因標(biāo)本中一般同時(shí)存在較高濃度的IgG抗體，后者將競賽結(jié)合固相抗原而使一部份IgM抗體不能結(jié)合到固相上。因而如用抗人IgM作為二抗，間接測定IgM抗體，必須先將標(biāo)本用A蛋白或抗IgG抗體處理，以除掉IgG的攪擾。

在臨床查驗(yàn)中測定抗體IgM時(shí)多選用捕獲包被法。先用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標(biāo)本中的IgM（其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。然后加入抗原，此抗原僅與特異性IgM相結(jié)合。繼而加酶符號針對抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標(biāo)本中的IgM成正相關(guān)。此法常用于病毒性感染的前期確診。甲型肝炎病毒（HAV）抗體的檢測形式見圖2-7。類風(fēng)濕因子（RF）同樣能攪擾捕獲包被法測定IgM抗體，導(dǎo)致假陽性反響。因而中和IgG的間接法近來頗受青睞，用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。
 

7.ABS-ELISA法
ABS為親和素(avidin)生物素(biotin)體系(system)的略語。親和素是一種糖蛋白，分子量60000，每個(gè)分子由4個(gè)能和生物素結(jié)合的亞基組成。生物素為小分子化合物，分子量244。用化學(xué)辦法制成的衍生物素- 羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質(zhì)和糖等多種類型的大小分子構(gòu)成生物素符號產(chǎn)品，符號辦法較為簡潔。生物素與親和素的結(jié)合具有很強(qiáng)的特異性，其親和力較抗原抗體反響大得多，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為安穩(wěn)。因?yàn)橐粋€(gè)親和素可與 4個(gè)生物素分子結(jié)合，因而如把ABS與ELISA法可分為酶符號親和素-生物素（LAB）法和橋聯(lián)親和素-生物素（ABC）法兩種類型。

兩者均以生物素符號的抗體（或抗原）代替原ELISA體系中的酶標(biāo)抗體（抗原）。在LAB 中，固相生物素先與不符號的親和素反響，然后再加酶符號的生物素以進(jìn)一步進(jìn)步敏感度。在前期，親和素從蛋清中提取，這種卵親和素為堿性糖蛋白，與聚苯乙烯載體的吸附性很強(qiáng)，用于ELISA中可使本底增高。從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素則無此缺點(diǎn)，在ELISA使用中有替代前者的趨勢。因?yàn)锳BS-ELISA較一般ELISA多用了兩種試劑，增加了操作過程，在臨床查驗(yàn)中ABS-ELISA使用不多。