為什么你的ELISA檢測結果不理想？
ELISA作為經典的免疫檢測方法，看起來很平常，然而真正做好它并不容易。有哪些方法可以借鑒呢？

我們總結了幾點：
1. 確定您的樣本類型和試劑盒可以兼容
常見樣本類型有血清，血漿，細胞培養(yǎng)上清，如果是廠家實驗驗證過的，可根據(jù)產品說明購買使用。【注意：血漿制備用到的抗凝劑有 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等多種，相應的血漿性質存在差異，需單獨確認兼容性】。

2. 試劑盒檢測范圍需要匹配樣本中標志物濃度
ELISA試劑盒的定量檢測范圍需參考標準曲線，在標準曲線低和高濃度區(qū)間內屬于線性范圍，其中的值是可信和可定量的。濃度高于線性范圍的樣品要稀釋到線性范圍內來測量，而濃度低于線性范圍的樣品，其測量值不能用于計算濃度，只能用做參考。有一種常見的相關情況是：健康人樣本中很多標志物的濃度偏低，測量值低于標準曲線低值。

3. 樣本收集有講究
以血清為例，樣本收集可參考試劑盒說明書，但需注意以下要點。樣本盡量用無菌管收集，避免細菌的酶類和代謝產品對結果的影響。采集過程要避免溶血，因為紅細胞溶解釋放的活性物質可能會影響檢測。保存過程中如有沉淀，應離心后取上清液。樣本若不立即測定，建議按照每次使用量分裝保存在 -20℃，每次檢測使用一管，即避免交叉污染和反復凍融，有能保證檢測結果的平行可比性。

4. 實驗前要準備好相應試劑
提前將所有試劑平衡到室溫環(huán)境，這個過程大致需半小時左右。洗液是濃縮液，如有結晶析出，需*溶解后再進行稀釋。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液。為保證蛋白標準品溶液配制質量，蛋白標準品為凍干粉，ELISA試劑盒重溶前需將管子離心，加入說明書的緩沖液，慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻，至少 15 分鐘，不建議用槍頭吹打。溶解后如需保存，按每次使用量分裝后根據(jù)說明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標準品時，建議用聚丙烯管（對蛋白吸附力很低），每步都要充分混勻且更換新槍頭，確保梯度準確性。

5. 儀器設備的準備也*
相關設備包括移液器、洗板機/搖床和酶標儀。移液器的準確性對于ELISA實驗結果的可靠性十分關鍵，需要確保定期校準維護。搖床的使用是為了讓反應體系快速達到平衡，獲得穩(wěn)定、可重復的結果。不用搖床對實驗通常的影響是，OD 值低，CV 大。酶標儀等設備使用前提前 15 分鐘開機預熱。