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當(dāng)前位置:上海紀寧實業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>做ELISA標準曲線時需要注意這幾個問題
做ELISA試劑盒實驗的老師們都知道ELISA標準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結(jié)果,甚至是關(guān)系到實驗的成敗。今天我司就和大家一起來看下我們在做ELISA標準曲線時需要重點注意的細節(jié)問題。
1. 設(shè)置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。
而對于呈S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
2. 檢測標準樣品時,應(yīng)按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
3. 標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。
4. 做出的標準曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎?,但一般來說,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999。
5. 樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
6. 采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
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