轉(zhuǎn)染 ，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技能。隨著基因與蛋白功用研討的深化，轉(zhuǎn)染目前已成為試驗室工作中常常涉及的根本辦法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微打針和基因槍歸于通過物理辦法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)辦法許多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染辦法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技能；生物介導(dǎo)辦法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技能。

    抱負(fù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染辦法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染功率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技能，是目前轉(zhuǎn)染功率的辦法，同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是，病毒轉(zhuǎn)染辦法的準(zhǔn)備程序雜亂，常常對細(xì)胞類型有很強的挑選性，在一般試驗室中很難遍及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染辦法，則各有其特色。

    需求指出的一點，無論采用哪種轉(zhuǎn)染技能，要取得*的轉(zhuǎn)染成果，或許都需求對轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化。影響轉(zhuǎn)染功率的因素許多，從細(xì)胞類型、細(xì)胞培育條件和細(xì)胞生長狀況，到轉(zhuǎn)染辦法的操作細(xì)節(jié)，都需求考慮。

一、細(xì)胞株傳代

1.試驗準(zhǔn)備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培育皿，離心管。

2.棄掉培育皿中的培育基，用1ml的PBS溶液洗刷兩次。

3.用Tip頭參加1ml Trypsin液，消化1分鐘（37℃，5%CO2 ）。用手輕拍培育瓶壁，調(diào)查到細(xì)胞*從壁上脫落下來為止。

4.參加1ml的含血清培育基停止反應(yīng)。

5.用Tip頭多次吹吸，使細(xì)胞*分散開。

6.將培育液裝入離心管中，1000rpm離心5min。

7.用培育液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計數(shù)后挑選0.8X106個細(xì)胞參加一個35mm培育皿。

8.將適宜體積*培育液參加離心管中，混勻細(xì)胞后悄悄參加培育皿中，使其均勻分布。

9.將培育皿轉(zhuǎn)入CO2培育箱中培育，第二天轉(zhuǎn)染。

二、細(xì)胞株轉(zhuǎn)染

1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備

① 將400ul去核酸酶水參加管中，震動10秒鐘，溶解脂狀物。

② 震動后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震動。

2.挑選適宜的混合比例（1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量）來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中參加適宜體積的無血清培育基。參加適宜質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震動后在參加適宜體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震動。

3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。

4. 吸去培育板中的培育基，用PBS或者無血清培育基清洗一次。

5. 參加混合液，將細(xì)胞放回培育箱中培育一個小時。

6. 到時后，依據(jù)細(xì)胞品種決議是否移除混合液，之后參加*培育基持續(xù)培育24－48小時。

三、第2次細(xì)胞傳代

1. 在轉(zhuǎn)染后24小時，調(diào)查試驗成果并記錄綠色熒光蛋白表達(dá)狀況。

2. 再次進(jìn)行細(xì)胞傳代，依照免疫染色適宜的密度0.8X105個細(xì)胞/35mm培育皿將細(xì)胞從頭轉(zhuǎn)入培育皿中。

3. 在正常條件下培育24小時后依照染色要求條件固定。