4香豆酸輔-酶A連接酶4CL測試盒_花青素合成
測定方法：分光光度法
產品規(guī)格：50管/24樣
注 意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
4CL 是連接苯丙酸途徑與木質素特異合成途徑的關鍵酶，主要催化肉桂酸生成相應的肉桂酸輔酶 A 酯，是合成木質素與其他苯丙烷類化合物的代謝流向調控點。該酶主要存在于高等植物、酵母和菌類中，研究該酶可以探討多種生物細胞發(fā)育過程中木質素沉積的代謝機理，為減少水果石細胞含量而提高其品質提供依據(jù)。
4香豆酸輔-酶A連接酶4CL測試盒_花青素合成
測定原理：
4CL 催化 4-香豆酸和 CoA 生成 4-香豆酸 CoA，在 333nm 下測 4-香豆酸 CoA 生成速率，即可反映 4CL 活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 60 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×2 瓶，-20℃保存；
粗酶液提?。?br/>
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、 分光光度計 40℃預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 333nm，蒸餾水調零。
2、 樣本測定
（1）在試劑二中加入 12.5mL 試劑一充分溶解混勻，置于 40℃水浴預熱 10min；現(xiàn)配現(xiàn)用
（配好后 24h 內用完）；
（2） 測定管：在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 樣本和 950μL 試劑二，混勻，立即記錄
333nm 處 40℃反應 30min 后的吸光值 A2。
環(huán)保在線