氧化磷酸化系列_ATP含量測試盒
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣
注 意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
ATP廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測定ATP含量并且計算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。
氧化磷酸化系列_ATP含量測試盒
測定原理：
肌酸激酶催化肌酸和ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸含量，以此反應(yīng)ATP含量。
自備儀器和用品：
分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
試劑組成和配制：
酸性提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
堿性提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1支，4℃保存；臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑二：液體1.5mL×1支，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入500μL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：液體5mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：液體25mL×1瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)液：液體10mL×1瓶，2μmol/mLATP標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存；
ATP提取：
1、血清（漿）中ATP的提?。喊凑昭澹{）體積（mL）：酸性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1mL血清（漿），加入1mL酸性提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4 ℃離心10min；取上清液至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測（不可用于蛋白質(zhì)含量測定）。
2、組織中ATP的提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL酸性提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測（不可用于蛋白質(zhì)含量測定）。
3、細(xì)胞或細(xì)菌中ATP的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：酸性提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL酸性提取液），超聲波破碎1min（冰浴，強(qiáng)度20％或200W，超聲2s，停1s），8000g 4 ℃離心10min；取上清液至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測（不可用于蛋白質(zhì)含量測定）。
環(huán)保在線