檸檬酸(CA)含量測試盒_三羧酸循環(huán)系列
測定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
CA是生物體內(nèi)常見的有機(jī)酸，是重要的食品風(fēng)味物質(zhì)。此外，CA是三羧酸循環(huán)步反應(yīng)的產(chǎn)物。
檸檬酸(CA)含量測試盒_三羧酸循環(huán)系列
測定原理：
酸性條件下，檸檬酸還原Cr6+生成Cr3+，在545nm處有特征吸收峰；通過測定545nm吸光值的增加，即可計(jì)算出樣品中檸檬酸含量。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1支，－20℃保存。
試劑四：粉劑×1瓶，室溫保存。臨用前配制，加入5mL試劑一，充分溶解。
試劑五：液體×1瓶，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，250μmol/L檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
樣品處理：
1.液體樣品：取0.1mL液體加試劑一0.9mL，充分混勻，11000g， 4℃離心10min，取上清液待測。
2.組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。11000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
3.線粒體：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，600g/min，4℃離心5min；取上清至另一EP管中，11000g，4℃離心10min，棄上清（此上清液可用于細(xì)胞質(zhì)CA含量測定）；向沉淀中加試劑二200μl，以及試劑三2μl，充分懸浮溶解，11000g，4℃離心10min，取上清液待測。
4.細(xì)菌、真菌中：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；11000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
環(huán)保在線