微量法_羥甲基戊二酰CoA合成酶HMGCS測試盒
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
羥甲基戊二酰CoA合成酶是甲羥戊酸代謝途徑中的關鍵酶，催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA。
微量法_羥甲基戊二酰CoA合成酶HMGCS測試盒
測定原理：
HMGCS催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA，同時產(chǎn)生CoASH，使DTNB轉化為的TNB，在412nm下有特征吸光值。
所需的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃避光保存；臨用前加入3mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存；臨用前加入3mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑三：6mL×1瓶，4℃避光保存。
樣本測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。
2、在微量石英比色皿或96孔板中加入25μL試劑一、25μL試劑二和50μL試劑三，混勻，加入100μL樣本上清，迅速混勻后記錄412nm下初始吸光值A1和4min后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。
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