微量法-過氧化氫酶(CAT)測試盒(紫外吸收法)
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。
測定原理：
H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能夠分解H2O2，使反應(yīng)溶液240nm下的吸光度隨反應(yīng)時間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計算出CAT活性。
微量法-過氧化氫酶(CAT)測試盒(紫外吸收法)
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
工作液：液體24mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至240nm，蒸餾水調(diào)零。
2、測定前將CAT檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3、準備96孔UV板一塊（非普通酶標板，普通酶標板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小于340nm務(wù)必使用UV板）。
4、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL樣本和190μL工作液，混勻，記錄240nm下初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA＝A1-A2。
注意事項：出現(xiàn)負值怎么辦？
首先檢查吸光值是否超過3，如果超過3很可能是沒有用UV板，請換用UV板。如果未超過3，仍然出現(xiàn)負值則檢查反應(yīng)過程是否產(chǎn)生氣泡，氣泡多說明酶活性太高，氣泡影響產(chǎn)生了負值，可以將樣本用提取液稀釋10倍后再檢測。如果稀釋樣本或反應(yīng)體系沒有產(chǎn)生氣泡仍然出現(xiàn)較小的負值，說明該樣本測不到該酶活。
環(huán)保在線