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江蘇晶美生物科技有限公司

革蘭氏染色法的實驗步驟及鑒定原理

時間:2015-7-27閱讀:1079
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革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是:

1)涂片固定。

2)草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。

3)自來水沖洗。

4)加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。

5)水洗,用吸水紙吸去水分。

6)加95%酒精數(shù)滴,并輕輕搖動進行脫色,20秒后水洗,吸去水分。

7)蕃紅染色液(?。┤?/span>1分鐘后,自來水沖洗。干燥,鏡檢。

革蘭氏染色法鑒定原理:該染色法所以能將細菌分為G+菌和G-菌,是由這兩類菌的細胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同所決定的。G-菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì),而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低,故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質(zhì),增加了細胞壁的通透性,使初染的結(jié)晶紫和碘的復合物易于滲出,結(jié)果細菌就被脫色,再經(jīng)蕃紅復染后就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高,類脂質(zhì)含量少,經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小,通透性降低,因此細菌仍保留初染時的顏色,呈現(xiàn)藍紫色

其重要的臨床意義在于:1.鑒別細菌 2.選擇藥物 3.與致病性有關(guān):革蘭氏陽性菌能產(chǎn)生外毒素,革蘭氏陰性菌能產(chǎn)生內(nèi)毒素;而內(nèi)毒素主要是指革蘭氏陰性菌胞壁成分中的脂多糖,兩者的致病作用不同。

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