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乙醇酸氧化酶(GO)提取液的實驗方法及注意事項

時間:2019/5/6閱讀:2576
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   乙醇酸氧化酶(Glycolate oxidase,GO)是乙醇酸循環(huán)的一種酶,在乙醇酸代謝循環(huán)中乙醇酸通過乙醇酸氧化酶的作用而變成乙醛酸。光合作用與呼吸作用是植物代謝的兩大核心內(nèi)容,前者是物質(zhì)合成與能量儲存過程,屬于同化作用,為包括人來在內(nèi)的幾乎所有生物的生存提供物質(zhì)來源和能量來源;后者是物質(zhì)分解與能量釋放過程,屬于異化作用,為生命提供能量。通過測定樣品中乙醇酸氧化酶活性,了解植物的光合和呼吸代謝的基本方法。
   乙醇酸氧化酶(GO)提取液主要用于提取植物組織或果實中乙醇酸氧化酶。該試盒僅用于科研領域,不宜用于診斷或其他用途。
操作步驟(僅供參考):

1、取新鮮植物葉片,清洗干凈,吸水紙吸干,加入預冷的GO Lysis buffer,冰浴情況下充分勻漿或研磨,經(jīng)紗布或濾紙過濾,將濾液置于離心管或試管。

2、離心,取上清液置于新的離心管或試管,調(diào)節(jié)pH 值,離心,取上清液。

3、不斷混勻,離心,取上清液。

4、不斷混勻,離心,棄上清液,留取沉淀即為乙醇酸氧化酶粗制品。

5、加入適量的GO懸浮液溶解沉淀,使其體積為開始提取液體積的1/10,即為乙醇酸氧化酶粗提液,保存待用??煽紤]采用BCA蛋白定量法等檢測乙醇酸氧化酶粗提液中蛋白質(zhì)的濃度。
注意事項:

1、實驗材料應盡量新鮮,如取材后不立即使用,應存于-20~-80℃。

2、如果沒有分光光度計,也可以使用普通的酶標儀測定,但應考慮酶標儀的大檢測體

積。

3、所測樣本的濃度過高,應用乙醇酸氧化酶(GO)提取液稀釋樣品后重新測定。

4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期:12個月有效

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