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MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒的使用方法

時(shí)間:2019/5/7閱讀:1656
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    MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測。MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan。在特定溶劑存在的情況下,可以被*溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測定570nm波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快,則吸光度越高;細(xì)胞毒性越大,則吸光度越低。
     噻唑蘭(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT),也稱作溴化噻唑藍(lán)四氮唑,是一種黃色染料,已經(jīng)普遍替代傳統(tǒng)的臺盼藍(lán)染色法或者放射性同位素插入法,用來檢測細(xì)胞的活力,細(xì)胞增殖以及細(xì)胞毒性分析。檢測原理在于:MTT是一種可接受氫離子的化合物染料,帶正電荷,具有細(xì)胞膜滲透性。活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠催M(jìn)入的MTT還原成為水不溶性的深藍(lán)色MTT-甲臜結(jié)晶,而死細(xì)胞不具有此功能。甲臜結(jié)晶是不能穿透細(xì)胞膜,因此沉積在處于增殖且未受損傷的細(xì)胞內(nèi)。甲臜結(jié)晶可用DMSO或者酸化的異丙醇溶解出來,酶標(biāo)儀下測定570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量與活細(xì)胞數(shù)目成正比,用以評估細(xì)胞存活狀況。
保存條件:
    4℃或-20℃保存,MTT需避光保存,一年有效;MTT配制成溶液后需-20℃避光保存;Formazan溶解液也可以室溫保存。
注意事項(xiàng):
   1、由于使用96孔板進(jìn)行檢測,如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長,一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面,由于96孔板周圍一圈容易蒸發(fā),可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加PBS,水或培養(yǎng)液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方,以緩解蒸發(fā)。
   2、 MTT溶劑在低溫情況下會凝固,使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
   3、 MTT配制成溶液后為黃色,需避光保存,長時(shí)間光照會導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí),請勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
   
    4、 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
   
     信帆生物擁有一支在試劑研發(fā)、抗體研究、生物試劑及質(zhì)量管理方面具有豐富經(jīng)驗(yàn)的高素質(zhì)人才隊(duì)伍。環(huán)境優(yōu)美、整潔,從細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白純化、疫苗配制到小容量注射劑、分裝及鍋爐、空調(diào)、制水全套生物試劑線。檢驗(yàn)儀器均采用國內(nèi)外設(shè)備。的廠房設(shè)施、精良的儀器設(shè)備,從而確保了產(chǎn)品的質(zhì)量和檢測的快速、準(zhǔn)確、方便,在同行業(yè)中一直。
 

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