活細胞的染色

Hoechst熒光染料

    大家耳熟能詳?shù)腍oechst系列染料是一種雙苯甲亞胺（bisbenzimide）染料，主要有Hoechst 33258和Hoechst 33342等。它們是細胞膜通透性的小溝結(jié)合DNA染料，結(jié)合后發(fā)出明亮的熒光。Hoechst 33342的膜通透性比Hoechst 33258略好，相當(dāng)易溶于水，細胞毒性小。它們可被大多數(shù)常用的熒光光源所激發(fā)，表現(xiàn)出相對較大的斯托克斯位移（激發(fā)/發(fā)射波長約為350/460 nm），因此適合于多色標(biāo)記實驗。在未結(jié)合DNA時，它們有著復(fù)雜的pH依賴光譜，在pH5時的熒光產(chǎn)量比pH8時要高得多。SDS等表面活性劑還能使熒光增強。

    Hoechst染料普遍用于多個細胞分析，包括細胞周期和凋亡研究，而且它們還是常用的核酸復(fù)染劑。此外，Hoechst 33258還有一個特殊的應(yīng)用。由于它對瘧原蟲有毒性，因此可用于血液樣本的流式篩選，并評估患者的藥物敏感性。

SYTO核酸染料

    SYTO是活體核酸透性染料。這種染料對核酸的親和力較低，可通過被動運輸擴散透過大多數(shù)細胞的細胞膜。對活細胞和死細胞的DNA和RNA都可以進行染色。同時，也可用于革蘭氏陽性和陰性細菌的染色。染料通過紫外光或可見光激發(fā)而發(fā)出熒光。目前有藍、綠、橙和紅等幾種顏色。各種SYTO染料間的特性都不相同，包括細胞通透性、與核酸結(jié)合后熒光的增強度、激發(fā)和發(fā)射光譜、對DNA/RNA的親和力等。與專門用于DNA染色的DAPI和Hoechst染料不同，SYTO還可以對RNA進行染色，因此，經(jīng)過SYTO染色的細胞在細胞核和細胞質(zhì)中都可以觀察到染色。

    由于有些SYTO染料在中性pH條件下帶正電荷，因此也可以對線粒體染色。死亡的酵母細胞經(jīng)過染色后出現(xiàn)明亮的熒光，活的酵母細胞在線粒體和細胞核都可以觀察到熒光。一些SYTO的染色還可以用于觀察細胞凋亡。紅色的SYTO染料可以用來作為綠色熒光蛋白、凝集素或者非通透性綠色SYTOX染料的復(fù)染劑。一些綠色的SYTO染料則是很好的細胞核復(fù)染劑。