小鼠原代Ⅱ型肺泡上皮原代細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞基本屬性：

種屬來源：小鼠

組織來源：肺肺

生長特性：貼壁生長

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產(chǎn)品貨期：5-6周左右

運(yùn)輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制：僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：:小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞采用彈性蛋bai酶灌注消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞分離自肺組織；肺泡由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經(jīng)多次反復(fù)分枝成無數(shù)細(xì)支氣管，它們的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡。小肺泡細(xì)胞，又稱I型肺泡細(xì)胞，厚約0.1微米，基底部是基底膜，無增殖能力。大肺泡細(xì)胞，又稱Ⅱ型肺泡細(xì)胞，分泌表面活性物質(zhì)（二棕櫚酰），以降低肺泡表面張力。Ⅱ型肺泡細(xì)胞位于Ⅰ型肺泡細(xì)胞之間，數(shù)量較Ⅰ型肺泡細(xì)胞多，但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細(xì)胞小。細(xì)胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細(xì)胞核圓形，胞質(zhì)著色淺、呈泡沫狀。電鏡下，細(xì)胞游離而有少量微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)富含線粒體和溶酶體，有較發(fā)達(dá)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體。核上方有較多的分泌顆粒，電子密度高、大小不等，直徑約0.1-1.0μm顆粒內(nèi)含有平行排列的板層狀結(jié)構(gòu)，稱為嗜餓性板層小體。小體內(nèi)的主要成分為磷脂，以二棕櫚酰為主，此外還有糖胺多糖及蛋白質(zhì)等。顆粒內(nèi)物質(zhì)釋放出來后，在肺泡表面形成一層粘液層，稱為表面活性物質(zhì)（surfactant）。表面活性物質(zhì)有降低肺泡表面張力、穩(wěn)定肺泡大小的作用。呼氣時肺泡縮小，表面活性物質(zhì)密度增加，表面張力降低，防止肺泡過度塌陷；吸氣時肺泡擴(kuò)張，表面活性物質(zhì)密度減小，肺泡回縮力加大，可防止肺泡過度膨脹。表面活性物質(zhì)的缺乏或變性均可引起肺不張，過度通氣可造成表面活性物質(zhì)缺乏；吸入毒氣可直接破壞表面活性物質(zhì)。Ⅱ型肺泡細(xì)胞有分裂、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細(xì)胞的潛能，故具有修復(fù)受損傷上皮的作用。

細(xì)胞培養(yǎng)操作：

收貨處理取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

傳代密度細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

原代細(xì)胞培養(yǎng)的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結(jié)締組織等?：將組織從動物體中取出，并去除可能存在的外膜或結(jié)締組織等雜質(zhì)。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進(jìn)行消化。消化時間可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過濾、計數(shù)?：將消化后的細(xì)胞吹打到一個離心管中，然后過濾、計數(shù)。

五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計數(shù)后的細(xì)胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。

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