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上海一研生物科技有限公司
中級會(huì)員 | 第11年

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小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)elisa檢測試劑盒操作步驟

時(shí)間:2021/9/27閱讀:807
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小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)elisa檢測試劑盒操作步驟:


1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

人乳腺癌細(xì)胞;MDA-MB-231

人乳腺癌細(xì)胞;MDA-MB-435S

人乳腺癌細(xì)胞;MDA-MB-453

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人卵巢畸胎瘤細(xì)胞;PA-1

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人成骨肉瘤細(xì)胞;Saos-2

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SH-SY5Y

人卵巢腺癌細(xì)胞;SK-OV-3

人骨肉瘤細(xì)胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]

人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;A-204

人肺腺癌細(xì)胞;Calu-3

人腎癌Wilms細(xì)胞;G401

人肝癌細(xì)胞;Hep G2 [HepG2]

人急性早幼粒白血病細(xì)胞;HL-60

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人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞;MOLT-4

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H209

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人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞;RAMOS

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人腦瘤細(xì)胞;SF126

人腦瘤細(xì)胞;SF763

人腦瘤細(xì)胞;SF767

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人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞;THP-1

人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞;U251

人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞;U937 [U-937]

人胃腺癌細(xì)胞;BGC-823

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白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3/VP16-IL-2

TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3-VP16-TNFa

人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞;Jurkat, Clone E6-1

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