產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Luciferase firefly

產(chǎn)品中文名稱：熒光素酶

規(guī)格：10mg

貨號：EY-01X8581
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢:

序列:氨基酸序列來源于：Photinuspyralis（北美螢火蟲）正常表達(dá)的熒光素酶。

蛋白長度：重組螢火蟲熒光酶素，預(yù)測的理論分子:量為62 KDa。

純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE檢測

產(chǎn)品形式:液體形式

保存建議：本產(chǎn)品為液體溶液，需要保存在-20℃。為了保持酶活性:，從而保存更長時間，建議分裝，避免反復(fù)凍融。

運(yùn)輸條件:常溫運(yùn)輸

背景

螢火蟲熒光素酶催化熒光素與ATP的反應(yīng)并產(chǎn)生黃綠色光。該酶的分子量為62 kDa，在過氧化物酶體中表達(dá)。螢火蟲熒光素酶在細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)中非常有用，能用于細(xì)胞活性:檢測和ATP定量檢測的試劑盒研發(fā)。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

AMPK Beta1 (AMP-activated Protein Kinase beta-1 0.5mgAMPK Beta1 (AMP-activated Protein Kinase beta-1) 腺苷單0酸活化蛋白激酶β1抗原

CD44 Protein Human 重組人 CD44 蛋白

FOLR1重組小鼠 FOLR1 / FR-alpha 蛋白 Protein

LILRA5 Protein Rat 重組大鼠 LILRA5 蛋白

FCGR2A重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His 標(biāo)簽) Protein

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1(VEGFR-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human cryoglobulin (CG) ELISA Kit 人冷球蛋白(CG)檢測試劑盒

Humanmethoexate,MTXELISAKit 人喋呤(MTX)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

BombyxmoriLivetin,LT檢測試劑盒家蠶卵黃蛋白(LT)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

A含量比色法定量檢測試劑盒20次

MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1,IGFBP-1ELISAKit小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠氧化型檢測試劑盒   小鼠氧化型試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠氧化型試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠氧化型試劑盒、小鼠氧化型檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠試劑盒檢測試劑盒   小鼠試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠試劑盒、小鼠試劑盒檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠檢測試劑盒   小鼠試劑盒 動?動

大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP1)檢測試劑盒 ，英文名： MCP1 ELISA Kit

Podocin ELISA Kit 人Podocin 檢測試劑盒

Ratiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISAKit 大鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforcTn-I(RabbitcardiacoponinI)ELISAKit兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ

細(xì)胞糖類總量鐵比色法定量檢測試劑盒20次

Ratepidermalgrowthfactorreceptor,EGFRELISAKit大鼠表皮生長因子受體(EGFR)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

熒光素酶MFI2重組小鼠 MFI2 / CD228 / melanotransferrin 蛋白 Protein

半乳糖凝集素3(GAL3)重組蛋白 Recombinant Galectin 3 (GAL3)

IL11重組人 IL11 / Interleukin 11 / IL-11 蛋白 Protein

CD44 Protein Human 重組人 CD44 蛋白

SIRPG Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 SIRPG / SIRP gamma / CD172g 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。