人總*（TC）ELISA試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：人總*（TC）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中總*（TC）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測定標(biāo)本中人總*（TC）水平。用純化的人總*（TC）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的總*（TC）標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的總*（TC）待檢樣品，溫育后，加入*標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總*（TC）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人總*（TC）濃度。
試劑盒組成
| 1 | 20倍濃縮洗滌液 | 50ml×1瓶 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品S1（18 nmol/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 2 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml×1瓶 | 標(biāo)準(zhǔn)品S2（12 nmol/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 標(biāo)準(zhǔn)品S3（6 nmol/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 4 | *標(biāo)記的抗-IgG抗體 | 6ml×1瓶 | 標(biāo)準(zhǔn)品S4（3 nmol/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 標(biāo)準(zhǔn)品S5（1.5nmol/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 密封袋 | 1個 |
| 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 3張 |
| 8 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 12 | 說明書 | 1份 |
標(biāo)本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟
1. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
3. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。
5. 加*標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入*標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
6. 洗滌：操作同4。
7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌：操作同4。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
線形范圍：1nmol/L -20nmol/L
規(guī)格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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