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上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司
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【產(chǎn)品名稱】
中文名稱：大鼠血紅素氧合酶1（HO-1）酶聯(lián)免疫試劑盒
【包裝規(guī)格】
96T/盒
【預(yù)期用途】
僅供科研使用，本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中血紅素氧合酶1（HO-1）含量。
【檢測原理】
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠血紅素氧合酶1（HO-1）水平。用純化的大鼠血紅素氧合酶1（HO-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血紅素氧合酶1（HO-1），再與HRP標(biāo)記的血紅素氧合酶1（HO-1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血紅素氧合酶1（HO-1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠血紅素氧合酶1（HO-1）濃度。
【產(chǎn)品性能】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣(如有漏氣，不影響使用）。
2、劑量反應(yīng)曲線線性
標(biāo)準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9900。
3、檢測范圍
70pg/ml-1700pg/ml 。
4、靈敏度
檢出劑量不能小于17.5pg/ml。
5、精密度
精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV 表示。CV（%） = SD/mean×100
批內(nèi)差：取同批次試劑盒對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測，每份樣本連續(xù)測定20 次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批間差：選取3 個(gè)不同批次的試劑盒分別對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量測定，每個(gè)樣本使用同一試劑盒重復(fù)測定10 次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批內(nèi)差： CV<4.9%
批間差： CV<6.5%
6、回收率
分別往5個(gè)不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍和平均回收率。
【操作步驟】
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
1600pg/ml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
800pg/ml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
400pg/ml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200pg/ml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100pg/ml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
8.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10-20分鐘。
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
注意：
1.試劑準(zhǔn)備：試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用。準(zhǔn)備一次實(shí)驗(yàn)所需要的酶標(biāo)條，其它的可從微孔板上拆下，密封，按照說明書要求保存，以備下次使用。
2.加樣：實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的滅菌吸頭，避免污染。加樣時(shí)注意不要有氣泡產(chǎn)生，將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。與反應(yīng)試劑加入一樣，加樣過程中第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣時(shí)間間隔盡量?。ㄒ话憧刂圃?0 分鐘以內(nèi)），如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育"時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。為了測值的準(zhǔn)確性，推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
3.溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)，洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)，同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度。
4.洗滌：濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。充分洗滌非常重要，在每次洗滌過程中，都要將洗滌液*甩干。洗滌過程中反應(yīng)孔內(nèi)殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干，勿將吸水紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要輕輕擦除板底殘留的液體和手指印，避免影響最后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。如果使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)?jiān)谑炀毷褂煤笤儆糜谡綄?shí)驗(yàn)過程中。
5.反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如觀察到顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
6.底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
