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如何科學(xué)挑選適用的ELISA試劑盒?實(shí)驗(yàn)人必看的避坑指南
一、明確檢測(cè)目標(biāo)?1.檢測(cè)對(duì)象是什么??明確待測(cè)物是細(xì)胞因子、激素、病毒抗體還是其他蛋白。不同試劑盒針對(duì)的抗原表位和抗體對(duì)可能不同。關(guān)鍵點(diǎn):查看試劑盒說明書中的“檢測(cè)范圍”和“交叉反應(yīng)”,確認(rèn)是否覆蓋你的目標(biāo)物種和異構(gòu)體(如人/小鼠/大鼠)。2.需要定量還是定性??定量試劑盒需提供標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線,適合精確測(cè)量濃度;定性試劑盒(如診斷用)通常只判斷陰陽(yáng)性。二、匹配樣本類型?不同樣本的處理方式可能影響檢測(cè)結(jié)果:血清/血漿?:需避免溶血、脂血(可能引起非特異性結(jié)合)。細(xì)胞培養(yǎng)上清?:注意培養(yǎng)基中是否 -
人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA實(shí)驗(yàn)說明
檢測(cè)范圍1pg/ml-80pg/ml使用目的本試劑盒用于測(cè)定樣本表皮生長(zhǎng)因子(EGF)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)水平。用純化的人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長(zhǎng)因子(EGF),再與HRP標(biāo)記的表皮生長(zhǎng)因子(EGF)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的表皮生長(zhǎng)因子(EGF) -
一、核糖體的定義與結(jié)構(gòu)?核糖體?是細(xì)胞中負(fù)責(zé)?蛋白質(zhì)合成?的分子機(jī)器,由核糖體RNA(rRNA)和多種蛋白質(zhì)組裝而成。分類?:原核生物核糖體?(70S):由30S小亞基(16SrRNA+21種蛋白)和50S大亞基(23S/5SrRNA+34種蛋白)組成。真核生物核糖體?(80S):包含40S小亞基(18SrRNA)和60S大亞基(28S/5.8S/5SrRNA)。結(jié)構(gòu)特征?:功能活性位點(diǎn)?:包括解碼中心(識(shí)別mRNA密碼子)、肽基轉(zhuǎn)移酶中心(催化肽鍵形成)及新生肽鏈通道。動(dòng)態(tài)組裝?:核糖體亞基在
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小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA實(shí)驗(yàn)說明
檢測(cè)范圍25ng/L-800ng/L使用目的本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。用純化的小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入腫瘤壞死因子α(TNF-α),再與HRP標(biāo)記的腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下 -
ELISA實(shí)驗(yàn)的核心三要素:不可-或缺的三大試劑
一、ELISA基本原理ELISA通過抗原-抗體的特異性結(jié)合,利用酶催化底物顯色反應(yīng)進(jìn)行定量或定性分析。常見的類型包括直接法、夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法,但其核心步驟均依賴于以下三類關(guān)鍵試劑:二、核心試劑一:包被抗體/抗原——實(shí)驗(yàn)的“基石”?作用?:作為固相載體(微孔板)的固定化分子,捕獲目標(biāo)物。選擇要點(diǎn)?:純度與活性?:高純度避免交叉反應(yīng),確保結(jié)合效率(建議使用單克隆抗體)。包被濃度優(yōu)化?:預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳濃度(通常1-10μg/mL),濃度過高易導(dǎo)致空間位阻。緩沖液選擇?:碳酸鹽緩沖液(pH9.6)常用,避 -
雞高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA實(shí)驗(yàn)說明
檢測(cè)范圍0.8μg/L-26μg/L使用目的本試劑盒用于測(cè)定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)水平。用純化的雞高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入高遷移率族蛋白B1(HMGB-1),再與HRP標(biāo)記的高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn) -
人晚期糖基化終末產(chǎn)物 (AGEs) ELISA實(shí)驗(yàn)說明
檢測(cè)范圍20pg/ml-480pg/ml使用目的本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)水平。用純化的人晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs),再與HRP標(biāo)記的晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸 -
白細(xì)胞介素6(IL-6):免疫系統(tǒng)的“開關(guān)”與科研新視角
一、定義與分子特性白細(xì)胞介素6(IL-6)是一種由184個(gè)氨基酸組成的糖蛋白,分子量約22-28kDa,其基因位于人類第7號(hào)染色體,通過四螺旋結(jié)構(gòu)傳遞信號(hào)。IL-6主要由免疫細(xì)胞(如單核/巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞)和非免疫細(xì)胞(如內(nèi)皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞)分泌,是連接先天免疫與適應(yīng)性免疫的“樞紐型”細(xì)胞因子。二、生物學(xué)功能與信號(hào)傳導(dǎo)1.核心生物學(xué)功能免疫調(diào)節(jié):激活B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞,促進(jìn)抗體生成;調(diào)控Th17/Treg細(xì)胞平衡,維持免疫穩(wěn)態(tài)。炎癥放大:誘導(dǎo)肝臟合成C反應(yīng)蛋白(CRP)、鐵調(diào)素等急性期蛋白,并招