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雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)(double immunodiffusion test)是一種分析鑒定抗原、抗體純度和抗原特異性的試驗(yàn)，即抗原和抗體分子在凝膠板上擴(kuò)散，二者相遇并達(dá)到最適比例時(shí)形成沉淀線。
原理
雙向擴(kuò)散法是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在瓊脂介質(zhì)中相互擴(kuò)散而形成一定類型沉淀線的方法。沉淀線的特征與位置不僅取決于抗原抗體的特異性及相互間濃度比例，而且與其分子大小及擴(kuò)散速度相關(guān)。當(dāng)抗原抗體存在多種系統(tǒng)時(shí)，可呈現(xiàn)多條沉淀線以至交叉反應(yīng)。
方法
1.將已溶化的1%瓊脂鹽水管放56~60℃水浴箱中平衡溫度備用。
2.將載玻片置于水平桌面上，傾注已溶化瓊脂3.5~4ml，使成厚度約1.5mm瓊脂板。
3.凝固后，將打孔模板置于瓊脂板下，然后用打孔器打孔，根據(jù)不同需要可制成三角型、方陣型或梅花型。本次實(shí)驗(yàn)采用三角型，即每一個(gè)三角型的三個(gè)孔為一組。(因本次實(shí)驗(yàn)所制備的瓊脂板均以載玻片為底板故根據(jù)其大小只能采用三角型同時(shí)每一瓊脂板也只能制成兩組。否則，如采用方陣型或梅花型則因瓊脂板邊緣瓊脂厚度不夠而使周邊各孔所加抗原或抗體量不足或溢出，如制成三角型三組，因各孔相距過近相互滲透擴(kuò)散而難于正確判定結(jié)果)。
4.用微量加樣器加抗體各10μl。各組所余兩孔各按抗原1、2為一組，3、4為二組，5、6為三組，分別各加入10μl。注意每加一樣品均需更換加樣器塑料吸頭，以防止交叉現(xiàn)象影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.作好記錄，放濕盒中，置37℃溫箱，24小時(shí)后觀察結(jié)果。
結(jié)果說明
(1)融合性沉淀弧，說明兩孔中抗原相同，為同一性反應(yīng)。
(2)兩沉淀線獨(dú)自形成并形成交叉，說明兩孔中的抗原*不同，為非同一性反應(yīng)。
(3)融合性沉淀弧出現(xiàn)支線，或同時(shí)有另一條或兩條沉淀線，說明兩孔中抗原有相同部分又有不同部分，此為部分同一性反應(yīng)。
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