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生物大分子藥物是指分子量大于1000的生物活性分子，如多肽、蛋白質(zhì)等。采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行生物大分子藥物制劑分析，可以對(duì)大分子抗原進(jìn)行定量測(cè)定，對(duì)于生物大分子藥物制劑的早期研究和開(kāi)發(fā)作用巨大。
制劑中常含有賦形劑、稀釋劑和附加劑，因此與原料藥物不同。藥物制劑分析指的是對(duì)不同劑型的藥物，利用物理、化學(xué)，甚至微生物測(cè)定的方法進(jìn)行分子檢測(cè)，以檢驗(yàn)被檢查的制劑是否符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定要求。蛋白多肽類(lèi)藥物具有免疫原性，因此可以采用免疫分析法測(cè)定生物體液中的蛋白多肽類(lèi)藥物。常用的免疫分析方法有放射免疫分析(RIA)、免疫放射分析(IRMA)和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)等。而其中ELISA最為常用，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、高效、非放射性、重復(fù)性好、批量測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。
與化學(xué)合成藥物顯著不同的是，生物大分子藥物，(Biological，macromolecule，BMM)具有生物活性，多膚分子的活性與其一級(jí)結(jié)構(gòu)相關(guān)，蛋白質(zhì)分子的活性除取決于一級(jí)結(jié)構(gòu)外，還與構(gòu)象密切相關(guān)圖。BMM的一級(jí)結(jié)構(gòu)與構(gòu)象往往呈現(xiàn)高度不穩(wěn)定性，對(duì)溫度、pH、有機(jī)溶劑耐受性差，易粘附在塑料和玻璃容器內(nèi)壁，故要求分析條件比較溫和；BMM是強(qiáng)效活性物質(zhì)，干擾素純化后可達(dá)2~8，x，108，u，/mg，而臨床使用劑量低，所以要求分析方法靈敏度高；由于BMM制劑中往往須加入人與牛血清白蛋白(HSA、BSA)，以提高其穩(wěn)定性，這樣許多蛋白質(zhì)總量測(cè)定法如Lowry法、雙縮脈法就不能直接應(yīng)用，而且BMM的降解產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與母體很相似，這就要求分析方法特異性高。
ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷。而且ELISA法免去放射性核素的污染，免疫反應(yīng)后不需分離就可直接測(cè)定，靈敏度接近前者。由于酶與抗體都是大分子，二者結(jié)合常因位阻而導(dǎo)致活性高化，降低酶標(biāo)結(jié)合物的作用，引人親合素-生物su系統(tǒng)可以大大提高靈敏度。一個(gè)抗體分子可偶聯(lián)多個(gè)生物su分子，而一個(gè)生物su分子僅與一個(gè)酶標(biāo)親合素結(jié)合，故可呈現(xiàn)放大效應(yīng)。
ELISA的基本原理有3條：
（1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；
（2）抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
（3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
由于ELISA法一方面是建立在抗原與抗體免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上，因而具有特異性。而另一方面又由于酶標(biāo)記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物，它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生放大作用，正因?yàn)榇朔N放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此ELISA法是一種既敏感又特異的方法。
ELISA應(yīng)用的范圍很廣，而且正在不斷地?cái)U(kuò)大，原則上ELISA可用于檢測(cè)一切抗原、抗體及半抗原，可以直接定量測(cè)定體液中的可溶性抗原。酶免疫試驗(yàn)（EIA）結(jié)合光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡可進(jìn)行抗原定位與結(jié)構(gòu)的研究，用酶標(biāo)記抗原或抗體結(jié)合免疫擴(kuò)散及免疫電泳可提高試驗(yàn)的敏感性。在實(shí)際應(yīng)用方面可作疾病的臨床診斷、疾病監(jiān)察、疾病普查、法醫(yī)檢查、獸醫(yī)及農(nóng)業(yè)上的植物病害的診斷檢定等。因此，它和生物化學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、藥理學(xué)、流行病學(xué)及傳染病學(xué)等方面密切相關(guān)。
ELISA試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)又可以用于少量標(biāo)本的檢測(cè)，既可以做定性試驗(yàn)也可以用于大分子藥物制劑分析等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。ELISA的影響因素較多，加強(qiáng)質(zhì)量管理才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。免疫學(xué)方法的缺點(diǎn)是不能同時(shí)測(cè)定代謝物，具有抗原決定簇的代謝片段可能會(huì)增加實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差；不同來(lái)源的抗體與相同的蛋白多肽反應(yīng)可能有較大的差別；可能受到內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。當(dāng)免疫分析法與其他分離技術(shù)聯(lián)用時(shí)可以解決某一缺點(diǎn)，用LC法結(jié)合RIA技術(shù)對(duì)胰高血糖激素類(lèi)似肽(GLP)-2的體內(nèi)外代謝物進(jìn)行了分離及鑒定，解決了單獨(dú)用RIA法導(dǎo)致的交叉免疫反應(yīng)。
