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ELISA實(shí)驗(yàn)中樣本的收集和運(yùn)輸

2023-5-30  閱讀(1084)

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酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)可以用于:

(1)檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等;

(2)具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。 ELISA的樣本收集與運(yùn)輸: 利用ELISA進(jìn)行檢驗(yàn)常見(jiàn)的樣本一般包括血液(指血,靜脈血),尿,糞便,腦脊液,胸腹水,前列腺液,分泌物等,這些樣本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。 ELISA實(shí)驗(yàn)中的血清需采用血管收集血液,室溫血液自然凝固30分鐘,1000xg離心15分鐘左右,收集上清,分裝后,標(biāo)好號(hào),-20°C-80°C保存。運(yùn)輸是用干冰。(注:一個(gè)樣本檢測(cè)一個(gè)指標(biāo)至少需要40ul血清,您是一個(gè)樣本檢測(cè)4個(gè)指標(biāo),至少需要160ul血清,多準(zhǔn)備一些。) 光鏡:肝臟組織4%多聚甲醛固定后密封,4度或者常溫保存即可,運(yùn)輸時(shí)用冰袋。 電鏡:一定要是新鮮的組織加到新鮮配置的2.5%戊二醛中固定后,4度保存,電鏡所需的組織塊不需要太大,米粒大小即可,運(yùn)輸時(shí)用冰袋即可。 免疫組化:取適當(dāng)?shù)慕M織放于4%的多聚甲醛中固定,密封,避光,四度或常溫保存,運(yùn)輸時(shí)加冰袋即可。 RT-PCRWB:取下肝臟組織,置于-80或者液氮中保存,運(yùn)輸時(shí)用泡沫保溫盒加干冰。 注意事項(xiàng): 血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。如在冰箱中保存過(guò)久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。一般說(shuō)來(lái),在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過(guò)一周測(cè)定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落,所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。 按試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。


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