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上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司
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酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）可以用于：
（1）檢測大分子抗原和特異性抗體等；
（2）具有快速、靈敏、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。 ELISA的樣本收集與運(yùn)輸： 利用ELISA進(jìn)行檢驗(yàn)常見的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液,分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。 ELISA實(shí)驗(yàn)中的血清需采用血管收集血液，室溫血液自然凝固30分鐘，1000xg離心15分鐘左右，收集上清，分裝后，標(biāo)好號，-20°C或-80°C保存。運(yùn)輸是用干冰。（注：一個(gè)樣本檢測一個(gè)指標(biāo)至少需要40ul血清，您是一個(gè)樣本檢測4個(gè)指標(biāo)，至少需要160ul血清，多準(zhǔn)備一些。） 光鏡：肝臟組織4%多聚甲醛固定后密封，4度或者常溫保存即可，運(yùn)輸時(shí)用冰袋。 電鏡：一定要是新鮮的組織加到新鮮配置的2.5%戊二醛中固定后，4度保存，電鏡所需的組織塊不需要太大，米粒大小即可，運(yùn)輸時(shí)用冰袋即可。 免疫組化：取適當(dāng)?shù)慕M織放于4%的多聚甲醛中固定，密封，避光，四度或常溫保存，運(yùn)輸時(shí)加冰袋即可。 RT-PCR和WB：取下肝臟組織，置于-80或者液氮中保存，運(yùn)輸時(shí)用泡沫保溫盒加干冰。 注意事項(xiàng): 血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。 按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
