聯(lián)系電話
上海勁馬實驗設(shè)備有限公司
中級會員·17年
- 聯(lián)系人：
- 馮經(jīng)理
- 電話：
- 021-60521817
- 手機：
- 13817140470
- 售后：
- 86-021-61107441
- 傳真：
- 86－021－64881400
- 地址：
- 上海市松江區(qū)漕河涇研展路455號B座
- 個性化：
- www.shjmsw.com
- 手機站：
- m.shjmsw.com
- 網(wǎng)址：
- www.shjmsw.com
掃一掃訪問手機商鋪
ELISA實驗中正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的第一步，下面就和大家簡單介紹在ELISA實驗中對不同類型樣本的處理方法！
1、 血清
血清是常用于ELISA檢測的一類樣本，處理比較簡單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一晚上，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清大程度的析出)。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
采血過程中應(yīng)避免溶血，因紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，從而導(dǎo)致檢測的不準確性，同時也應(yīng)避免細菌污染，因菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。
2、 血漿
ELISA實驗用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融，避免使用溶血或高血脂的標本。
3、 細胞培養(yǎng)上清
取細胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質(zhì)取上清。(-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。)
4、 細胞裂解液
(1)吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用yi酶消化細胞，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。(懸浮細胞可省略)
(2)收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
(3)加入適量的預(yù)冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
(4)將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細胞充分裂解。
(5)4℃10000×g離心10min，除去細胞碎片取上清。(-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。)
5、組織勻漿液
(1)將組織樣本用PBS 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
(2)將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊小，便于勻漿得充分。
(3)將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。(具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))
(4)吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g 離心5-10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
6、 尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min，取上清即可檢測。
小結(jié)：
ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，故應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。為保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本盡量在1~6個月內(nèi)進行檢測；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進行檢測。(保證樣本不含NaN3，NaN3會抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。)
