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上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司
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檢測范圍：
0.1μmol/L -8μmol/L
使用目的：
本試劑盒用于測定相關(guān)液體樣本中膽汁酸（BA）的含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標(biāo)本中膽汁酸（BA）水平。用純化的膽汁酸（BA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入膽汁酸（BA），和HRP標(biāo)記的膽汁酸（BA）抗原，使它們競爭結(jié)合，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的膽汁酸（BA）的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中膽汁酸（BA）的含量。
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本處理：（1）水樣 采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過濾后，備查
（2）組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，備查
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
2.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
7.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
8.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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