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上海勁馬何于昨日親臨公司實驗室,與我司科研人員共同進行人α乳清蛋白ELISA試劑盒實驗,實驗結(jié)束后何就實驗中如何降低ELISA背景的問題闡述了自己的觀點和看法:
洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊,其實很重要,因為如果未結(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結(jié)合反應。如果背景過高,可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
封閉更關(guān)鍵
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結(jié)合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見:切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時應加入終止液。
以上是上海勁馬何為您講解的關(guān)于ELISA試劑盒在實驗中背景過高的處理方法,如果您還有什么疑問可來電向我們咨詢,我們將一一為您解答。
上海勁馬實驗設備有限公司主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā)及銷售,并代理銷售二十多個國外,致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供*的科研試劑和完善的技術(shù)服務,滿足生物化學、分子生物學 、細胞生物學、免疫學等生物科技實驗需求。
公司主營產(chǎn)品:胎牛血清,進口血清,放免試劑盒,檢測試劑盒,ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,抗體,進口試劑,標準品,對照品,培養(yǎng)基等科研試劑。