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許多科研愛好者們在做ELISA試劑盒實驗時總會碰到各種各樣的問題,那么為了避免問題再次困擾到您的實驗,上海勁馬今天要為您介紹的是:ELISA試劑盒基礎知識問答普及篇。
問題:ELISA加樣時如何防錯?
解決方案:
(1)用一張寫滿字的紙,字越多越好,比如報紙,墊在下面,這樣,加過標本的小孔看過去下面的字會變小,沒加的字正常,非常容易區(qū)分。
(2)可以利用液面反光與沒有加的孔加以區(qū)別
(3)在標本加完后,再把加樣槍全壓下,使液面產生小氣泡,可以區(qū)分
問題:如何正確使用酶結合物?
解決方案:
1.酶結合物的稀釋液
在稀釋液中常加入高濃度的無關蛋白質(例如1%BSA或5%脫脂奶粉),通過競爭抑制酶結合物在固相載體上的非特異性吸 附。一般還加入能夠抑制蛋白質吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑,如吐溫20(0.05%的濃度較為適宜)。
2.正確稀釋酶結合物
酶 結合物的合適工作濃度需要通過預實驗來確定,濃度過高易導致本底偏高,濃度過低則會導致陽性信號的減弱。
酶結合物在使用前稀釋,稀釋后的酶 結合物不宜長期保存,因為低濃度的酶結合物極易失活。
問題:血清如何避免沉淀物的產生?
解決方案:
1、解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20。C至37。C),實驗顯示非常容易產生沉淀物。
2、解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生
3、請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
5、若必須做血清的熱滅活,請遵守56。C,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。 [5]血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。
關于上海勁馬為您介紹的以上部分解決方案對您的實驗是否有所幫助呢?如果您的ELISA試劑盒實驗還有其他疑問,請登錄我司留言或咨詢我司在線工作人員,我們將一一為您解答。
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