聯(lián)系電話
上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司
中級(jí)會(huì)員·17年
- 聯(lián)系人：
- 馮經(jīng)理
- 電話：
- 021-60521817
- 手機(jī)：
- 13817140470
- 售后：
- 86-021-61107441
- 傳真：
- 86－021－64881400
- 地址：
- 上海市松江區(qū)漕河涇研展路455號(hào)B座
- 個(gè)性化：
- www.shjmsw.com
- 手機(jī)站：
- m.shjmsw.com
- 網(wǎng)址：
- www.shjmsw.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
常見實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞爬片實(shí)驗(yàn)是科研人員比較頭疼的問題，因?yàn)樗鼤?huì)存在很多你意想不到的卻又十分重要的問題。以下就是實(shí)驗(yàn)室常見的也是學(xué)生經(jīng)常提到的細(xì)胞爬片的問題解答，給大家做這方面實(shí)驗(yàn)的一個(gè)參考意見，避免大家在實(shí)驗(yàn)過程中缺乏經(jīng)驗(yàn)而走彎路。
elisa試劑盒解析1. 細(xì)胞爬片可以用含疊氮鈉PBS液保存，但不知道具體濃度，請(qǐng)告知。
答：加在液體中作為防腐劑的疊氮鈉濃度一般為0.04–0.08%。但是我建議對(duì)于細(xì)胞爬片，還是盡量快的進(jìn)行處理，以防不必要的問題！
elisa試劑盒解析2. 我的細(xì)胞爬片經(jīng)過4%多聚甲醛固定，PBS沖洗后直接就放在了-20度，還能用于免疫組化嗎？！
答：應(yīng)該沒有問題，但是還是現(xiàn)作先染好些，以防抗原的丟失
3. mRNA原位雜交經(jīng)4%多聚甲醛固定,固定液需加DEPC水。其它建議用甲醇固定。－20度保存。
4. 如果是4%多聚甲醛固定，然后放在PBS中保存，在4度冰箱里保存兩周沒問題。時(shí)間再長就沒試過了。
5. 丙酮中固定5-10分鐘，然后風(fēng)干，放置4度保存過夜應(yīng)該是沒有問題。不要固定過夜，蛋白質(zhì)固定過度，會(huì)影響抗原的暴露，影響免疫組化結(jié)果。如果是胞漿 或胞核抗原出現(xiàn)假陰性結(jié)果，可考慮應(yīng)用0.5%的triton-100孵育30分鐘，滲透細(xì)胞膜。如果玻片沒有經(jīng)過特殊處理，不要用其他抗原修復(fù)的方法， 會(huì)造成掉片，我曾有過這方面的體會(huì)。
6. 丙酮固定后，PBS洗滌3次，即可保存至4度冰箱備用。
elisa試劑盒解析7. （1）細(xì)胞爬片先用TBS洗3次，每次5分鐘
（2）4%多聚甲醛固定，室溫，20分鐘
（3）70%-80%-90%-95%-100%梯度酒精脫水，通風(fēng)櫥內(nèi)干燥，-80度保存。2周沒有問題的，我保存過2個(gè)月都有信號(hào)，不過還是保存時(shí)間短一點(diǎn)的好。
8. 我的心肌細(xì)胞爬片用不同濃度的乙醇依次脫水后,就放在室溫中,因?yàn)槭且碾婄R,但是學(xué)校電鏡壞了,呵呵,所以放了一個(gè)月后去拍,還是很好。
9. 細(xì)胞爬片用4%多聚甲醛或冷丙酮等固定，用PBS沖洗后，晾干，放在-20度保存一個(gè)月沒有問題的。
10. 細(xì)胞爬片，有機(jī)溶劑如4%多聚甲醛或冷丙酮等固定后，輕輕搖動(dòng)玻片或培養(yǎng)皿等，靜置2 min左右，棄去固定液，不用PBS洗而是采用空氣干燥，干燥后的標(biāo)本可于-70℃長期保存。解凍時(shí)要小心抗原破壞，應(yīng)先將標(biāo)本轉(zhuǎn)移于干冰預(yù)冷的固定液， 然后再將混合液轉(zhuǎn)移至室溫下，固定液到達(dá)室溫時(shí)取出標(biāo)本，再用PBS沖洗，在做以后的步驟。
11. 我也做過細(xì)胞爬片的組化染色，不過沒有遇到類似的問題。細(xì)胞培養(yǎng)好后用PBS洗一遍，然后4%多聚甲醛4度固定15分鐘，自然風(fēng)干。室溫保存幾周內(nèi)都可 以用的。我想這可能與抗原的類型有關(guān)，有的對(duì)氧化等損傷比較敏感，有的差一些。避光保存在4度，同時(shí)盡量隔絕空氣。免疫熒光與普通DAB顯色差別只再 二抗的標(biāo)記，樣品的保存應(yīng)該是沒有多大差別的。
12. 細(xì)胞爬片丙酮固定后-20度保存，現(xiàn)在要再做免疫熒光，將保存的爬片拿出37度復(fù)溫然后常規(guī)操作就可以了。
13. 爬片做免疫組化的優(yōu)勢(shì)在于抗原新鮮，細(xì)胞形態(tài)保存較好。若爬片需長期保存并出現(xiàn)你這樣的問題，原因可能是：1）試驗(yàn)步驟有誤，建議重復(fù)并加陽性對(duì)照片。 2）加一抗前處理同石蠟切片，可進(jìn)行抗原修復(fù)，如胰酶消化或熱修復(fù)。3）因?yàn)榭乖贵w反應(yīng)在液相中進(jìn)行，故對(duì)已極度干燥的爬片充分水化很重要。建議試驗(yàn)前 用PBS浸泡過夜。如不能解決你的問題請(qǐng)：。本人在湖南省腫瘤醫(yī)院病理科（長沙市）做免疫組化。
14. 4%多聚甲醛或冷丙酮固定都可以，也有用*的，固定好后放-20度，2-3個(gè)月是沒有問題的。
elisa試劑盒解析15. 對(duì)于一般的細(xì)胞免疫組化，我的做法是：細(xì)胞爬片用冰的純丙酮固定20 min，再在通風(fēng)柜將丙酮吹干，—-20度保存，用丙酮固定作用是沉淀蛋白質(zhì)和糖，穿透性很強(qiáng)，保存抗原的免疫活性好。所以丙酮常用做細(xì)胞細(xì)胞爬片的固定 劑。當(dāng)然還是要根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康臎Q定用那種固定劑。
如：1．多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫電鏡；也可用于免疫熒光染色。 主要檢測(cè)組織內(nèi)一些性能嬌弱的抗原特別是細(xì)胞表面抗原，例如各類淋巴細(xì)胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等。
2．乙醇。優(yōu)點(diǎn)：穿透性強(qiáng)、抗原性保存較好。缺點(diǎn)：但醇類對(duì)低分子蛋白質(zhì)、多肽及胞漿內(nèi)蛋白質(zhì)保存效果較差，使蛋白變性的作用輕，固定后可再溶解；染色過程中，溫育時(shí)間長，抗原可流失而減弱反應(yīng)強(qiáng)度。
3．甲醛(福爾馬林)應(yīng)用zui廣 優(yōu)點(diǎn)：形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好，且穿透性強(qiáng)， 缺點(diǎn)： 甲醛放置過久可氧化為甲酸，使溶液pH降低，影響染色； 分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或*掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露?？稍斐杉訇幮缘娜旧Y(jié)果。
16. 4度是不能保存這么長時(shí)間（1個(gè)月）的，如果抗原已被分解，再修復(fù)也沒用！
17. 棄去固定液，不用PBS洗而是采用空氣干燥，干燥后的標(biāo)本可于-70℃長期保存。
18. 爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒鐘，然后在4%多聚甲醛中固定15分鐘，然后再用37度去離子水將甲醛沖干凈，注意手法輕柔，要不然掉片很厲害。同時(shí)操作過程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功盡棄。
將做好的爬片置于濾紙上晾干，然后用中性樹膠粘在載玻片上。注意一定要等中性樹膠*干了之后才能做后續(xù)實(shí)驗(yàn)，要不然玻片會(huì)掉下來的，就又是前功盡棄了 做好的細(xì)胞爬片可以放在-20保存?zhèn)溆?，具體能保存多長時(shí)間不太清楚，當(dāng)然盡量早用。
19. 固定后放點(diǎn)PBS，然后放在4度冰箱中保存，我zui長保存兩個(gè)月的，然后再做免疫組化，應(yīng)該沒有太大的問題的。
20. 固定后4度可以存放一周，-20度存放半年，我現(xiàn)在也要做這個(gè)，實(shí)驗(yàn)室老師教的。
21. 四度放1周應(yīng)該沒問題的，你放在-20度，我在-20度放一個(gè)月都還出結(jié)果的．很多人作的片子很多，不可能一次作完，一個(gè)月沒問題。
根據(jù)我們小編的經(jīng)驗(yàn)之談，您對(duì)細(xì)胞爬片還有什么問題嗎？不要著急，您有任何關(guān)于此類相關(guān)問題解決不了，都可以查詢本，為您解決，我們的技術(shù)團(tuán)隊(duì)都是來自國內(nèi)外大學(xué)人士，有著多年豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。為您的實(shí)驗(yàn)解決后顧之憂。上海勁馬您選對(duì)了！！
