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為何免疫組化染色時(shí)必須*抑制內(nèi)源性過氧化物酶的活性,才能降低背景的染色?
在各種組織中都含有很多的內(nèi)源性過氧化物酶,尤其在紅細(xì)胞,中性粒細(xì)胞,單核細(xì)胞嗜酸性細(xì)胞,出血的組織壞死的組織等等。含有這種酶的各細(xì)胞和組織如果在染色前不對其進(jìn)行處理和抑制,它們將會(huì)在DAB底物的顯色時(shí),與HRP一樣催化底樣,使之顯色,使之與陽性物一樣的黃棕色,造成混亂。為止,在免疫組化染色前,都必須對內(nèi)源性過氧化物酶進(jìn)行抑制。當(dāng)然,對它們進(jìn)行*的消除是不行的,因?yàn)橐种铺珔柡?,對抗原也?huì)有相同的抑制作用。氫在抑制內(nèi)源性過氧化物酶時(shí),也要注意對抗原的保護(hù)抑制也只能對它們中的大部分在DAB顯色后,顯示出淡黃色,這就足以與真正陽性物的區(qū)別。抑制劑常用的是0.3%的H2O2,也可將其稱為1%H2O2,因?yàn)槭惺鄣腍2O2的濃度為30%,按其凈含量則為0.3%,如果按其溶液的用量則為1%。
關(guān)于H2O2的使用,有的使用是單純的H2O2稀釋溶,有的使用是H2O2甲醇混合 物。根據(jù)實(shí)驗(yàn),認(rèn)為H2O2甲醇較適合于大多數(shù)的情況,因?yàn)槌薍2O2外,甲醇對各種酶,都有鈍化的作用,因此H2O2甲醇的雙重作用效果較好。陳尚平等認(rèn)為在多數(shù)情況中,用甲醇H2O2已經(jīng)獲得令人滿意的結(jié)果。
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