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一年一度的高考來了，無論您家今年有沒有考生，我們都清楚的知道高考對于學子們的重要意義！上海勁馬在此祝愿學子們在高考中旗開得勝！一鳴驚人！金榜題名！今天勁馬小編將帶您了解CK8檢測細胞增殖/毒性的注意事項和常見問題歸納！讓您關注高考與掌握試劑常見問題兩不誤！
注意事項：
1.酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
2.CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染，以免影響結果。
3.當在培養(yǎng)箱內培養(yǎng)時，培養(yǎng)板zui外一圈的孔zui容易干燥揮發(fā)，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，zui外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。
4.在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應考慮藥物的吸收，可在加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450nm的吸光度作為空白對照。
5.金屬對CCK8顯色有影響：當終濃度為1 mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制5%、15%、90%的顯色反應，使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話，將會100%抑制。
6.懸浮細胞由于染色比較困難，一般需要增加細胞數量和延長培養(yǎng)時間。
常見問題歸納：
1：CCK的保存和穩(wěn)定性如何？
答：CCK穩(wěn)定性高，避光條件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。經常使用建議4℃保存，避免反復凍融。CCK正常顏色為粉紅色，若顏色發(fā)生明顯偏差，質量可能有發(fā)生變化。
2：CCK的細胞毒性如何？
答：CCK毒性非常低，因此CCK檢測完后相同的細胞還能用于其它細胞增殖檢測如結晶紫染色法，中性紅染色法或DNA熒光染色法。
3：CCK會對活細胞進行染色嗎？
答：不會，首先WST-8不會進入細胞染色，整個顯色反應都是在培養(yǎng)體系中進行的。另外WST和WST-8甲臜都屬于高度水溶性組分，反應結束更換新的培養(yǎng)液，即可清除外源組分。
4：做細胞活性檢測時，每孔應該接種多少個細胞？
答：當使用標準96孔板時，貼壁細胞的zui小接種量至少為1,000個/孔(100 μL培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100 μL培養(yǎng)基)。
5：在加入CCK-8時可否不更換培養(yǎng)基？
答：一般情況下可以不更換培養(yǎng)基。但是如果培養(yǎng)基里有氧化還原性物質的話，有可能會產生誤差，必須更換其它培養(yǎng)基。
6：若是使用6孔或者24孔板進行試驗，CCK試劑使用量怎么樣呢？
答：如果要使用6孔板或24孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。
7：能否用384孔板進行細胞增殖與活性檢測的實驗呢？
答：可以，CCK-8產品的使用量為每孔培養(yǎng)基總體積的10%。建議先將CCK-8產品稀釋一倍，然后加入培養(yǎng)基總體積的20%即可，這樣可減少誤差。
8：只可以在450 nm波長處測OD值嗎？
答：可以在450 nm波長處測OD值，但是若無此波長的濾光片，可選擇吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測靈敏度高。
9：若是暫不檢測OD值，該如何處理？
答：若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化
10：在實驗中OD值太高，怎么解決？
答：可以縮短加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。例如：可以把加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間由2小時縮短為1小時。此外，可適當減少細胞的數量。
11：如果OD值太低，怎么解決？
答：可以采取2個辦法：1、適當增加細胞數量 2、延長加入CCK-8試劑后的反應時間。
12：應該每次做標準曲線嗎？
答：建議每次做。雖然細胞是一樣的，但是細胞的狀態(tài)不一定一樣。對于狀態(tài)不一樣的細胞，建議每次做標準曲線。
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