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ELISA實(shí)驗(yàn)新手必知

2018-12-25  閱讀(2227)

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    收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時(shí);更長時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融;

    洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水);

    標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成400ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,*管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在*管中加入400ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。

檢測程序:
加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。每孔中加入抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
洗板:同前。每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
洗板:同前。每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。每孔加入100ul終止液混勻。30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。

       

結(jié)果計(jì)算與判斷方法:
1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2.以標(biāo)準(zhǔn)品40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0 ng/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)IGF-1R含量。

試劑盒優(yōu)點(diǎn)有哪些?
1.系出名門: 試劑盒原料如抗體對、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物和底物等均選自大廠,并經(jīng)過嚴(yán)格的甄選。
2.認(rèn)可: 目前已有超過290篇SCI文獻(xiàn)引用,其中包括Nature, PNAS等雜志引用。同時(shí)有超過個(gè)1100篇國內(nèi)核心期刊、博士及碩士學(xué)位論文引用。
3.品質(zhì): 所有指標(biāo)試劑盒均經(jīng)過近乎苛刻的質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)。對不合格產(chǎn)品執(zhí)行零容忍。
4.廣泛使用: 全國超過2000個(gè)客戶在使用,累計(jì)檢測超過70萬樣本。
5.品種齊全: 提供近200種常用指標(biāo)檢測試劑盒,如細(xì)胞因子、趨化因子及其他可溶性蛋白等。提供人、大鼠、小鼠、猴和牛的相關(guān)檢測試劑盒。

它的注意事項(xiàng)是什么?
1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。
3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5.我司所售試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!

    勁馬以誠信為本,努力打造的品牌,為您提供的售中、售前、售后服務(wù),具有的技術(shù)團(tuán)隊(duì),把上的產(chǎn)品引入國內(nèi)市場,滿足國內(nèi)廣大客戶的需求,在二十一世紀(jì)生命科學(xué)蓬勃發(fā)展的時(shí)代,將緊跟生命科學(xué)的發(fā)展動(dòng)態(tài),為廣大科研學(xué)者探索生命的奧秘而奉獻(xiàn)綿薄之力!

       

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