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科研小伙伴們，又和大家見面了，今天我們給大家分析的是ELISA實(shí)驗(yàn)方法之競爭法檢測抗體，在之前的文章里面，已經(jīng)為大家介紹了競爭法檢測抗原、雙抗原夾心法檢測抗體、雙抗體夾心法、間接法檢測抗體等ELISA實(shí)驗(yàn)方法，不知道您大家是否還有印象呢？如果沒有印象的話沒有關(guān)系，查閱我們之前更新的文章就好了，如您在這其中有其他疑問的話，可以前來咨詢我司技術(shù)人員哦！
競爭法檢測抗體
競爭法測抗體的反應(yīng)模式與競爭法測抗原類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)的抗體。當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競爭與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。如抗原為高純度的，可直接包被固相。競爭法測抗體有多種模式，可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競爭結(jié)合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一種模式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競爭結(jié)合，洗滌后再加入酶標(biāo)抗體，與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)?？笻Be的檢測一般采用此法。
競爭法的簡要操作步驟：
1）先加入特異性抗原，使抗原固定結(jié)合于載體表面；
2）加入梯度濃度比例的待測樣品與酶標(biāo)抗體混合物，并做只加酶標(biāo)抗體的對照組；
3）加入酶促反應(yīng)底物，發(fā)生顯色反應(yīng)，對比實(shí)驗(yàn)組及對照組的顯色差異，計算未知抗體的量。
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