基底膜/基質(zhì)膠Matrigel技術(shù)說明書      Matrigel基底膜/基質(zhì)膠

Catalog Number : 40111ES08 

Quantity size :   5  ml   

保存溫度: -20 °C保存，有效期6個(gè)月。

產(chǎn)品介紹：

　 Matrigel是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質(zhì)，其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白，還包含生長(zhǎng)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。在室溫條件下，Matrigel聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，可用于對(duì)細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)等的研究。

Matrigel基底膜/基質(zhì)膠形成的三維培養(yǎng)基質(zhì)，可促進(jìn)上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、Sertoli細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、甲狀腺細(xì)胞及毛囊細(xì)胞等的貼壁與分化。同時(shí)，Matrigel還能影響乳腺上皮細(xì)胞的蛋白表達(dá)，支持外周神經(jīng)的新生和牛輸卵管上皮細(xì)胞的分化。

本Matrigel基底膜/基質(zhì)膠為無菌制品，濃度為9-20mg/ml，滿足多種實(shí)驗(yàn)要求，包括：血管生成研究，腫瘤細(xì)胞遷移和細(xì)胞侵襲，體內(nèi)腫瘤模型建立等。

產(chǎn)品特性基底膜/基質(zhì)膠Matrigel技術(shù)說明書

凍融后，輕輕搖晃試劑瓶使 Matrigel 分散均勻。所有操作均需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，試劑瓶瓶蓋可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥。應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證 Matrigel 呈勻漿狀。

細(xì)胞可在 0.5mm 厚度的 Matrigel 基質(zhì)層表面生長(zhǎng)，也可在 1mm 厚度的 Matrigel 三維基質(zhì)內(nèi)生長(zhǎng)。過度稀釋的 Matrigel 會(huì)形成非膠質(zhì)的蛋白層，可以用于細(xì)胞貼壁，但不能用于細(xì)胞的分化研究。

產(chǎn)品使用：可將凍融后的 Matrigel 分裝在多個(gè)小管，所有分裝均需用預(yù)冷的凍存管，迅速冷凍并保存，避免多次凍融。

Matrigel 在 22-35℃溫度環(huán)境下快速成膠，因此溶解時(shí)在 4℃冰上 凍融（4 度時(shí)會(huì)隨著

溫度的上升部分成膠）。所有用品在使用前需置于冰浴，必須使用預(yù)冷的移液管、吸頭及小管操作 Matrigel。成膠后的 Matrigel 可以在 4℃24－48 小時(shí)后重新呈液態(tài)。

推薦包被與成膠方法

注意：為了保證 Matrigel 基質(zhì)膜的成膠性能與穩(wěn)定性，稀釋濃度不應(yīng)低于 1：3，可用無血清培養(yǎng)基稀釋，Matrigel 成膠后立即使用。

1.薄膠成膠方法：

1） 凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻 Matrigel 基質(zhì)成勻漿狀。

2） 將需要使用基底膜/基質(zhì)膠Matrigel熱銷的培養(yǎng)板置于冰上，按 50μL/cm² 生長(zhǎng)面積的濃度加入Matrigel 基質(zhì)。

3） 在 37℃放置 30 分鐘，此時(shí)平板即可使用。

2.厚膠成膠方法：基底膜/基質(zhì)膠Matrigel技術(shù)說明書

1） 凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻 Matrigel 基質(zhì)成勻漿狀。

2） 將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴，將培養(yǎng)的細(xì)胞與 Matrigel 基質(zhì)混合，用預(yù)冷的移液槍頭使其懸浮均勻于基質(zhì)中。按照150－200μL/cm² 生長(zhǎng)面積的濃度加入 Matrigel 基質(zhì)。

3） 在 37℃放置 30 分鐘，可成膠?？梢约尤爰?xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì)，也可使細(xì)胞直接生長(zhǎng)在膠表面。

3.薄層包被方法：

1） 凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻 Matrigel 基質(zhì)成勻漿狀。

2） 采用無血清培養(yǎng)基稀釋 Matrigel 基質(zhì)到需要的濃度。建議根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)做個(gè)梯度實(shí)驗(yàn)，從而確定 包被濃度。

3） 將稀釋的 Matrigel 基質(zhì)加入需要包被的培養(yǎng)器皿中，包被量至少覆蓋整個(gè)器皿的生長(zhǎng)表面。室溫下孵育1小時(shí)。

4） 去除未結(jié)合的 Matrigel，用無血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。此時(shí)平板即可使用。

 （注：Matrigel基質(zhì)膠包被的平板當(dāng)天使用，但也可根據(jù)具體應(yīng)用調(diào)整。包被好的平板加入培養(yǎng)基后，在37℃zui多可存放一周）

注意事項(xiàng)：

1）Matrigel基底膜/基質(zhì)膠的充分融化至少需要4℃ ，某些情況下，產(chǎn)品濃度很高，則需要更久的時(shí)間來融膠。

2）整個(gè)操作過程中，移液器、槍頭以及試管都必須提前預(yù)冷，因?yàn)镸atrigel基底膜/基質(zhì)膠在超過10℃的情況下就會(huì)開始成膠。

3）對(duì)于小管形成實(shí)驗(yàn)，Matrigel基底膜/基質(zhì)膠的濃度不少于10mg/ml。

4）Matrigel基底膜/基質(zhì)膠的使用濃度不要低于3mg/ml。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)為了防止不充分成膠，Matrigel基底膜/基質(zhì)膠的濃度不要基底膜/基質(zhì)膠Matrigel熱銷低于4mg/ml。

5)為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。