蛋白質系列

CAT#:RS90707-50

常溫運輸，4℃保存

RICKY

動植物總蛋白微量提取試劑盒

使用手冊 

上海瑞齊生物科技有限公司                            shrqsw

產品及特點

本產品用于快速提取動植物總蛋白，用于SDS-PAGE凝膠電泳和Western印跡分析以及蛋白活性測定等。本產品的其主要特點是：

提取過程十分簡便，勻漿離心即可，整個過程只需要十幾分鐘。

采用*的溫和裂解成分，蛋白保持天然活性。

適用于各種動植物組織材料，包括新鮮或冰凍的材料。

得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D電泳、Western印跡分析以及蛋白活性測定等下游實驗。

一次可以處理100mg左右的樣品，足夠進行幾十次SDS-PAGE mini膠電泳檢測。

規(guī)格及成分

運輸及保存

常溫運輸，4℃保存，5X SDS-PAGE上樣液短期4℃保存，*可放-20℃保存，有效期一年。

使用方法

使用前，請在溶液A中加入自備的1M DTT溶液50uL。

一：勻漿法

注意：對致密的實體組織（如肌肉），用Polytron式勻漿機勻漿處理。

• 稱取動物或植物組織樣品100 mg，剪刀剪成黃豆大小，轉移到10-15 mL的塑料離心管中。
• 加入1ml溶液A，在冰上用Polytron式勻漿機勻漿，直到?jīng)]有肉眼可見的組織塊。為了避免產熱，可以分多次勻漿，其間放冰上讓勻漿液冷卻。
• 將勻漿液全部轉移到1.5 mL的塑料離心管中。
• 4℃ 12,000 g離心10分鐘，組織殘渣碎片將形成沉淀。
• 將上清液轉移至一新的1.5 mL塑料離心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要進行SDS-PAGE電泳，可取部分到離心管中，加入5× SDS-PAGE上樣緩沖液（終濃度為1×），在沸水中處理5分鐘后立即上樣電泳。

二：直接研磨法

注意：可以使用玻璃和陶瓷的研缽，也可以使用與微量離心管式的研磨杵 

• 稱取動物或植物組織樣品100 mg，剪刀剪成黃豆大小，轉移到預冷的研缽或離心管中。
• 加入1ml溶液A，用研磨杵研磨，直到?jīng)]有肉眼可見的組織塊。
• 將勻漿液全部轉移到1.5 mL的塑料離心管中。
• 4℃ 12,000g離心10分鐘，組織殘渣碎片將形成沉淀。
• 將上清液轉移至一新的1.5 mL塑料離心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要進行SDS-PAGE電泳，可取部分到離心管中，加入5× SDS-PAGE上樣緩沖液（終濃度為1×），在沸水中處理5分鐘后立即上樣電泳。

三：液氮研磨法

注意：使用玻璃和陶瓷的研缽

• 取大約100 mg動物或植物組織樣品，轉移到預冷的研缽中。
• 加入少量液氮，用研磨杵研磨成粉。
• 加入1ml溶液A溶解，然后將溶液全部轉移到1.5 mL的塑料離心管中。
• 4℃ 12,000 g離心10分鐘，組織殘渣碎片將形成沉淀。
• 將上清液轉移至一新的1.5 mL塑料離心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要進行SDS-PAGE電泳，可取部分到離心管中，加入5× SDS-PAGE上樣緩沖液（終濃度為1×），在沸水中處理5分鐘后立即上樣電泳。

注意：

1．如果4℃ 12,000 g離心10分鐘后得到的上清液中還有可見的沉淀，可以將上清轉移到一個新的離心管中后再4℃ 12,000 g離心10分鐘，以去除可見的小碎片。

2．植物組織中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代謝產物，如果需要除去植物蛋白樣品中殘存的色素等雜質，可以在zui后得到的上清液中加入5倍體積的冷丙酮或冷甲醇，混勻后-20℃放置1小時或過夜，然后4℃ 12,000 rpm離心10 min，棄上清后室溫風干，然后將樣品溶于自備的后續(xù)實驗緩沖液中即可。經(jīng)過此純化處理后，部分蛋白質可能會發(fā)生變性，不能再用于活性檢測。