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肝星狀細(xì)胞提取實(shí)驗(yàn)指南

時(shí)間：2013-7-30閱讀：1284

 肝星狀細(xì)胞提取實(shí)驗(yàn)指南

星狀細(xì)胞位于Disse間隙內(nèi),具有貯藏、代謝itA、合成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的功能;肝星狀細(xì)胞的激活是肝纖維化形成的中心環(huán)節(jié)。
 
建立了經(jīng)濟(jì)、穩(wěn)定的大鼠肝星狀細(xì)胞提取和培養(yǎng)方法;傳代培養(yǎng)可獲得較為穩(wěn)定的細(xì)胞系。肝星狀細(xì)胞提取實(shí)驗(yàn)步驟如下：
 
1、大鼠門靜脈置管，D-Hanks+肝素液灌注，*驅(qū)走肝內(nèi)血液，至灰黃色。
2、0.5g/L的膠原酶（Hanks）離體灌注，5ml/min, 5min。
3、0.25g/L的膠原酶（Hanks）+消0.05g/L的DNA-1酶（Hanks）消化，10min。
4、中止消化后200目過濾，重懸。
5、50g離心去沉淀、取上清。
6、上清500g離心取沉淀。
7、0.05g/L的DNA-1酶（Hanks）重懸，500g再次梯度離心，取沉淀。
8、15%Optipepe重懸為10ml，上加10%Optipepe 10ml，上覆hanks液5ml（加時(shí)注意不要讓界面混勻）
9、1400g離心17min，取白色細(xì)胞帶。
10、爬片，固定，鑒定。
 
來(lái)源：《改良的大鼠肝星狀細(xì)胞分離方法》拜力生物編輯整理

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