199．蘇州華宇凈化工作臺在山楂葉·果和籽提取液抗氧化性研究中的應(yīng)用

1．1 材料與試劑山楂葉、果和籽：采于連云港中云鄉(xiāng)，自然晾干，粉碎，過40目篩。蘆?。ㄖ袊幤飞镏破疯b定所）；無水乙醇、硝酸鈉、硝酸鋁、硫酸、氫氧化鈉均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）；氯化鈉分析純（南京化學試劑有限公司）；磷酸鈉、鉬酸銨、BHT均為分析純（上海試驗試劑有限公司）。1．2儀器設(shè)備DJ講移液槍（大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司）；BS．124S電子分析天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]；UV-722S分光光度計（上海棱光技術(shù)有限公司）；DK一$24型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏試驗設(shè)備有限公司）；SW-CJ一1F潔凈工作臺（蘇州市華宇凈化設(shè)備有限公司）；LS．B50L立式壓力蒸汽滅菌器（上海華線醫(yī)用核子儀器公司）。

1．3試驗方法

1．3．1 山楂葉、果和籽提取液的制備。分別取一定量山楂葉、果和籽粉末樣品，以70％乙醇作為浸提溶劑在85℃恒溫水浴下浸提2 h，過濾，得到相應(yīng)提取液。

1．3．2 山楂葉、果、籽提取液中總黃酮含量的測定【8 J。1．3．2．1 標準曲線的繪制。稱取5 mg蘆丁對照品，用60％乙醇溶解轉(zhuǎn)移至50 rnl容霞瓶中。定容，得到10 ms／ml 的蘆丁標準品乙醇溶液。分別準確移取0、l、2?3 4 5 ml上述溶液于10 I【ll容量瓶中，加入0．3 ml 10％硝酸鈉溶液，搖勻，放置6 min，加入0．3 ml 10％硝酸鋁溶液，搖勻，放置6min，加入4 ml 1 mol／L氫氧化鈉溶液，分別用60％乙醇定容，搖勻，放置15 min，以l號容量瓶中溶液為空白，在波長510 nm處測定吸光度。

1．3．2．2總黃酮含量的測定。采用硝酸鋁比色法。將山楂葉、果和粉末提取液在波長510姍處測得吸光度，用標準曲線回歸方程計算得到提取液中總黃酮含量。

1．3．3 山楂葉、果和籽提取液的處理。先將6個大藥瓶高壓蒸汽滅菌，再將20 rnl山楂葉、果和籽提取液分別裝入6個無菌大藥瓶中（每種各放2個無菌大藥瓶），由于黃酮不耐高溫高壓，因此采用巴氏消毒與間歇滅菌相結(jié)合的方法進行滅菌。將6個裝有提取液的大藥瓶置于水浴鍋中，80℃滅菌15 s，再取出藥瓶，置于37℃培養(yǎng)箱中保溫過夜，第2天再進行1次巴氏消毒。重復(fù)3次。

1．3．4抗氧化活性測定一J。采用磷鉬絡(luò)合物法。分別配制與山楂葉、果和籽提取液中總黃酮含量相同的BHT溶液作為對照組溶液BHT，、BHT2、BH％，進行測定。在lO IIll具塞

刻度比色管中各加入1．0 ml已滅菌山楂葉提取液、1．0 ml同濃度的BHT及1．0 ml山楂葉提取液與同濃度BHT的混合物，每管均加入1．O lnl 0．6 mol／L心S04溶液，1．0 Inl 0．028mol／L Na_3P04溶液，1．0 m10．004 tool／L（NH4）6M07024溶液，加入蒸餾水定容至5．O Illl，搖勻，置95℃水浴中加熱反應(yīng)O一150 min，每30 min取出1支，冷至室溫，測定波長695 nm。。處的吸光度，空白對照用1．0 rnl 70％乙醇做同樣的處理。山楂果和籽的測定方法同上，所有測定平行進行3次，取其平均值。根據(jù)吸光度大小可比較山楂葉、果和籽提取液與BHT的抗氧化能力。