Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)

植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化試劑盒（PEG法）

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

Plant Protoplast 植物原生質(zhì)體；PEG-mediated protoplast transformation 聚乙二醇介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化；Yakult Honsha；Cellulase R-10 纖維素酶R-10；Macerozyme R-10 離析酶R-10；二乙酸熒光素 (FDA) 原生質(zhì)體活力檢測；

產(chǎn)品信息

【溫馨提示】：見我司（MKBio）整理的植物細(xì)胞壁降解酶/消化酶產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品描述

原生質(zhì)體（Protoplast）是指植物細(xì)胞去掉細(xì)胞壁后的裸露部分，體外培養(yǎng)條件下，具有以下功能：1）具全能型，可再生細(xì)胞壁，進(jìn)行連續(xù)的細(xì)胞分裂且能再生成完整植株的能力；2）具攝取外源大分子、細(xì)胞器，以及細(xì)菌、病毒的能力，從而原生質(zhì)體是進(jìn)行遺傳操作，基因轉(zhuǎn)移的良好材料；3）通過同種和異種植物的原生質(zhì)體融合，可產(chǎn)生異核體，實(shí)現(xiàn)體細(xì)胞雜交，從而培育出具有抗病原或更高產(chǎn)量的新品種。

原生質(zhì)體（Protoplast）的制備主流的技術(shù)是酶解法，因其具有消化溫柔，操作簡單，且良好維持原生質(zhì)體完整性的特點(diǎn)。工作原理是根據(jù)植物細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)特征選擇合適的酶進(jìn)行處理，植物細(xì)胞壁主要由多糖（纖維素、半纖維素、果膠等）以及少量的蛋白和脂質(zhì)構(gòu)成。因此，通過使用纖維素酶、離析酶、半纖維素酶、果膠酶等復(fù)合酶來降解細(xì)胞壁，即可得到原生質(zhì)體。

原生質(zhì)體（Protoplast）的轉(zhuǎn)化方法很多，主要有PEG介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法、電機(jī)穿孔轉(zhuǎn)化法、脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法、農(nóng)桿菌共培養(yǎng)轉(zhuǎn)化法等。

本試劑盒是PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法，操作簡單和便捷。試劑盒含有植物原生質(zhì)體制備（不包含消化酶）和植物轉(zhuǎn)化需要的所有試劑，按照單次10ml酶液體系來算，可做20次。

試劑盒組分

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

• 需要準(zhǔn)備材料
  • 離析酶R-10（比如，Cat#：MX7351-1G, MKBio）
  • 纖維素酶R-10（比如，Cat#：MX7352-1G, MKBio）
  • 70μm細(xì)胞篩網(wǎng)（比如，Cat#：352350, BD Bioscience）
  • 平頭鑷子
  • 一次性刀片
  • 1.5ml離心管
  • 50ml離心管
  • 恒溫加熱水浴鍋

• 原生質(zhì)體分離

2.1 按照以下表格體系，配制即用型酶溶液：【注意：此溶液現(xiàn)配現(xiàn)用】

2.2 取生長狀態(tài)良好的葉片切成0.5-1mm的小條，按照20個(gè)葉片加10ml即用型酶溶液的比例迅速將切好的葉片小條浸泡于即用型酶溶液內(nèi)，室溫避光酶解3h。

【注意】：酶解時(shí)間與葉片類型、葉片生長狀態(tài)有關(guān)，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)進(jìn)行調(diào)整。酶溶液變?yōu)榫G色表明原生質(zhì)體已經(jīng)分離，顯微鏡鏡檢確定是否分離。

2.3 酶解后加入10ml溶液B，輕柔混勻。

2.4 用70μm細(xì)胞篩網(wǎng)過濾步驟2.3獲得的溶液，去除未消化的葉片和雜質(zhì)，收集濾液到50ml離心管內(nèi)。

2.5 濾液于100×g，室溫離心2min，吸掉上清。

2.6 加1ml溶液B重懸原生質(zhì)體，冰浴30min，使得原生質(zhì)體自然沉淀到底部。

2.7 小心吸掉上清，不要觸動(dòng)原生質(zhì)體沉淀。將沉淀重懸于1ml溶液C，即得到原生質(zhì)體溶液。

• 原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化
• 原生質(zhì)體培養(yǎng)和收集

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化試劑盒  植物細(xì)胞培養(yǎng)

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