Lysis Buffer for Nitric Oxide Assay

一氧化氮分析裂解液

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

Cell and Tissue Lysis Buffer 細(xì)胞和組織裂解液；Nitric Oxide Assay 一氧化氮檢測用；RIPA裂解液；Carboxy-PTIO 一氧化氮清除劑/NO清除劑；DAF-FM DA 一氧化氮探針；

基本描述：

一氧化氮分析裂解液（Lysis Buffer for Nitric Oxide Assay）是一款專門開發(fā)用于一氧化氮或總一氧化氮檢測用的細(xì)胞或組織裂解液。使用本品裂解所得的樣品，可用懋康生物的一氧化氮檢測試劑盒（CAT#：MX4731-500T）或總一氧化氮檢測試劑盒（CAT#：MX4732-50T）進(jìn)行檢測。

本品不含蛋白酶和磷酸酶抑制劑，由于添加抑制劑可能會干擾后續(xù)的一氧化氮檢測。經(jīng)本品裂解細(xì)胞或組織所得的蛋白樣品，可使用增強(qiáng)型BCA蛋白濃度測定試劑盒（貨號：MP1902-500T）測定總蛋白濃度。

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20℃凍存，1年穩(wěn)定。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

• 裂解樣品的所有步驟需在冰上或4℃進(jìn)行。

• 本品可耐受反復(fù)凍融。

• 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

• 培養(yǎng)的細(xì)胞樣品

• 充分融解一氧化氮分析裂解液，之后混勻待用。

貼壁細(xì)胞：吸除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照六孔板的每孔細(xì)胞加入100-200μl 裂解液的比例加量。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解15~30min，通常裂解液接觸細(xì)胞1-3秒后，細(xì)胞就會被裂解。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指彈散細(xì)胞。按照六孔板的每孔細(xì)胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必須分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

【裂解液用量說明】：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100μl裂解液已經(jīng)足夠，如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150μl或200μl。

• 充分裂解后，10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的一氧化氮或蛋白濃度測定等實(shí)驗(yàn)。樣品制備后如果當(dāng)日不能完成檢測，可以-20℃保存，但仍建議盡快完成檢測。

• 組織樣品

• 充分融解一氧化氮分析裂解液，之后混勻待用。

• 將組織剪切成細(xì)小的碎片，越小越好。取在液氮或超低溫冰箱冷凍30分鐘以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程控制在1-2min內(nèi)，以減少蛋白的降解。

• 按照每20mg組織加入100-200μl裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以適當(dāng)添加用量，如果需要高濃度的樣品，可適當(dāng)降低用量?！?/span>

• 用玻璃勻漿器或組織勻漿器勻漿直至充分裂解。（如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈渦旋使樣品裂解充分，之后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解的足夠充分。）

• 充分裂解后，10,000-14,000g離心3-5min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的一氧化氮或蛋白濃度測定等實(shí)驗(yàn)。樣品制備后如果當(dāng)日不能完成檢測，可以-20℃保存，但仍建議盡快完成檢測。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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一氧化氮分析裂解液 蛋白抽提

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