Sulfo-NHS (N-Hydroxysulfosuccinimide sodium salt)

N-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽

搜索關(guān)鍵詞

Sulfo-NHS-Biotin；Sulfo-NHS；NHS N-羥基琥珀酰亞胺； Sulfo-SMCC；異型雙功能交聯(lián)劑；NHS酯（胺基指向）；CAS NO：6066-82-6；CAS NO：119616-38-5；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

磺基琥珀酰亞胺生物*su（Sulfosuccinimidyl Biotin, Sulfo-NHS-Biotin）適用于快速、有效的標(biāo)記抗體、蛋白和其它含伯胺分子。Sulfo-NHS-Biotin具水溶性、膜非滲透性兩大特征，特別適用于標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白。細(xì)胞表面生物*su化已成為一種重要的工具，用來研究受體和轉(zhuǎn)運體的表達(dá)和調(diào)控、區(qū)分細(xì)胞質(zhì)膜蛋白和定位在細(xì)胞器膜上的蛋白，以及極化上皮細(xì)胞的膜蛋白分布，等等。由于Sulfo-NHS-Biotin容易溶于極性溶液，琥珀酰亞胺環(huán)上的磺酸鈉基團(tuán)使其帶電荷從而不能穿透細(xì)胞膜。只要細(xì)胞維持完整性，則僅有暴露在細(xì)胞表面的伯胺才能與其反應(yīng)，從而將蛋白生物 *su化。

水不溶性版的Sulfo-NHS-Biotin是NHS-Biotin（Cat#：MM3705），是廣泛使用的生物*su化試劑，兩者的工作原理相同，：在生理至弱堿性緩沖液（pH 7-9）中，NHS-Biotin與伯胺（-NH₂）反應(yīng)形成穩(wěn)定的酰胺鍵。蛋白（包括：抗體）通常含幾種可作為標(biāo)記靶標(biāo)的伯胺，包括賴氨酸殘基的側(cè)鏈和每條多肽的N末端。我司提供幾種不同的生物*su-NHS酯，具有不同的物理特性和臂長，包括：NHS-LC-Biotin、Sulfo-NHS-LC-Biotin。

產(chǎn)品特性

保存與運輸方法

保存：-20℃密封干燥保存，至少2年穩(wěn)定。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 1 Sulfo-NHS-Biotin對濕度敏感，需置于-20℃密封干燥保存。避免處理產(chǎn)品過程中受潮，務(wù)必開蓋前將本品平衡至室溫。

2） 務(wù)必于使用前在溶解粉末，由于NHS酯官能團(tuán)非常容易水化，從而失去反應(yīng)性。因此，不要配制用來保存的儲存液，丟棄任何未用完的溶液。

3） 避免使用含伯胺的緩沖液（比如：Tris、甘氨*suan），這些成分會競爭性排擠目的反應(yīng)。如有必要，通過透析或脫鹽的方式來更換成不含伯胺的反應(yīng)緩沖液比如：PBS。

4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟（溶液內(nèi)生物*su化蛋白）

1. 計算

生物*su標(biāo)記率取決于蛋白上氨基分布、蛋白濃度和試劑用量。與高濃度蛋白參與的反應(yīng)相比較，低濃度蛋白參與的反應(yīng)需要更高摩爾過量的生物*su試劑，以達(dá)到相同的標(biāo)記水平。使用20倍摩爾過量生物*su試劑來標(biāo)記1-10mg/ml抗體（體積：0.5-2ml）的得率，是每個抗體上標(biāo)記4-6個生物*su基團(tuán)。使用50倍摩爾過量生物*su試劑標(biāo)記50-200μg抗體（0.2-0.7ml）的得率，是每個抗體上標(biāo)記1-3個生物*su基團(tuán)。需調(diào)整Sulfo-NHS-Biotin與蛋白的摩爾比率來獲取理想的插入率。

A．計算加入反應(yīng)體系所需生物*su試劑（如：Sulfo-NHS-Biotin）的毫摩爾（millimoles）（20倍摩爾過量）

B．計算加入反應(yīng)體系得到10mM生物*su試劑（如：Sulfo-NHS-Biotin）所需的微升量（μl，microliters）

2. 生物*su標(biāo)記反應(yīng)

2.1 從冰箱取出生物*su試劑（如：Sulfo-NHS-Biotin），開蓋前平衡至室溫。

2.2 根據(jù)1計算所得，準(zhǔn)備溶于PBS的蛋白溶液。

2.3 使用前，配制10mM生物*su試劑（如：Sulfo-NHS-Biotin）。

2.4 加入適量體積的10mM 生物*su試劑（如：Sulfo-NHS-Biotin）到蛋白溶液。

2.5 冰上孵育2h或室溫孵育30min。

2.6 此時蛋白標(biāo)記完成，溶液內(nèi)雖有過量未反應(yīng)和水解的生物*su試劑，但通常情況下，此時標(biāo)記好的蛋白可以進(jìn)行后續(xù)的ELISA或WB實驗。一旦確認(rèn)好標(biāo)記蛋白的功能，再通過脫鹽或透析的方法來純化標(biāo)記蛋白。

操作步驟（生物*su化細(xì)胞表面蛋白）

1. 用預(yù)冷PBS（pH 8.0）清洗細(xì)胞三次，以去除任何含胺培養(yǎng)基和分泌蛋白。

2. 用PBS（pH 8.0）重懸細(xì)胞使其濃度為~25×10⁶細(xì)胞/ml。

3. 按照1ml細(xì)胞懸液加入1mg Sulfo-NHS-Biotin（得到~2mM生物*su試劑）?；?，按照1ml細(xì)胞懸液加入200μl 10mM生物*su試劑。

4. 室溫孵育30min。【注意】：4℃孵育可能減低生物*su試劑的內(nèi)在化反應(yīng)。

5. 用PBS（pH 8.0）+100mM甘氨*suan清洗細(xì)胞三次以淬滅和去除過剩的生物*su試劑和副產(chǎn)物。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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N-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽(二抗）

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