MitoTracke Orange CMTMRos 橙色線粒體熒光探針

產(chǎn)品標(biāo)簽

MitoTracke Orange CMTMRos 橙色線粒體熒光探針；MitoTracker Green FM 綠色線粒體熒光探針；Lysotracker Green 綠色溶酶體熒光探針；羅丹明123；JC-1 線粒體凋亡檢測；CAS: 201860-17-5；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

MitoTracke Orange CMTMRos是一種橙色熒光染料，用于對活細(xì)胞線粒體進(jìn)行染色，該染料的積累取決于膜電位。 乙醛固定后，該染料可穩(wěn)定保存。

產(chǎn)品特性

保存與運(yùn)輸方法

保存：≤-20°C避光干燥保存，收到貨至少12個(gè)月有效。 

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1） 本品量非常少，使用前低速離心后直接加適當(dāng)溶劑溶解使用，切勿分裝稱量。

2） 整個(gè)染色過程中需注意避光。

3） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 儲(chǔ)存液的配制

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進(jìn)行簡單低速離心使溶液降至管底。之后加入116.9946µL高質(zhì)量無水的DMSO溶解MitoTracke Orange CMTMRos（Mw=427.37 g/mol），使其濃度為1mM。儲(chǔ)存液能現(xiàn)用，若用不完，請根據(jù)單次用量分裝，≤-20℃避光干燥保存。

2. 工作液的配制

根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛?，以下的起始操作條件僅作參考，可根據(jù)細(xì)胞類型和其他的相關(guān)因素如細(xì)胞或組織的透化等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

利用培養(yǎng)基或合適的緩沖液將1mM 儲(chǔ)存液稀釋至工作濃度，工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。常用的工作濃度范圍是25-500nM，但對于后續(xù)需要進(jìn)行固定和透化的細(xì)胞染色，建議使用工作濃度范圍在100-500nM。為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

3.   染色步驟（貼壁細(xì)胞）

1）將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。

2）待細(xì)胞生長到合適密度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基。于特定的生長狀態(tài)下孵育15～45min（具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。

3）利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）或熒光酶標(biāo)儀下觀察。若細(xì)胞需固定和透化，參考染色后的固定和透化流程。

4.  染色步驟（懸浮細(xì)胞）

1）離心沉淀細(xì)胞，吸除上清。

2）利用37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，于特定的生長狀態(tài)下孵育15～45min（具體時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。

3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

4）用含合適濾片的流式細(xì)胞儀、基于酶標(biāo)板的分析儀或熒光顯微鏡觀察。如果需要將細(xì)胞固定在蓋玻片上，于固片前用poly-D-lysine包被載玻片或者蓋玻片。若細(xì)胞后續(xù)需要固定或透化，參考染色后的固定和透化流程。

5. 染色后的固定和透化流程

1） 染色后，用新鮮預(yù)熱的緩沖液或生長培養(yǎng)基清洗細(xì)胞；

2） 小心吸掉覆蓋細(xì)胞的緩沖液或培養(yǎng)基，用含2-4%多聚甲醛的新鮮配制預(yù)熱的緩沖液或培養(yǎng)基來固定。研究顯示內(nèi)皮細(xì)胞用3.7%多聚甲*-醛溶液于37℃固定約15min效果很好。

3） 固定之后，用緩沖液清洗細(xì)胞幾次；

4） 【可選】若后續(xù)步驟如ICC需要透化，則用含表面活性劑如Triton X-100的緩沖液來透化細(xì)胞。一旦透化結(jié)束，用緩沖液清洗細(xì)胞并進(jìn)行后續(xù)ICC流程。研究顯示，用含0.2% Triton X-100的PBS緩沖液透化內(nèi)皮細(xì)胞10min效果很好。

做為備選方案，細(xì)胞也可以用冰丙酮透化處理5min，之后用PBS清洗。即使后續(xù)細(xì)胞不用進(jìn)行其它抗體標(biāo)記，這一丙酮透化步驟也可能改善信噪比。

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