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上海懋康生物科技有限公司
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當(dāng)前位置:上海懋康生物科技有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)>>細(xì)胞增殖與凋亡>> MX3209-100T羅丹明123線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞增殖

羅丹明123線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞增殖

參  考  價(jià):880
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)

    MX3209-100T

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

20t 880元 1000支可售

更新時(shí)間:2024-05-29 11:29:52瀏覽次數(shù):902次

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羅丹明123線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞增殖 羅丹明123線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(Rhodamine 123 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit)是一種以羅丹明123為熒光探針,快速且靈敏的檢測(cè)細(xì)胞或純化線粒體膜電位變化的試劑盒。

Rhodamine 123 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit

羅丹明123線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒


 

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

價(jià)格(元)

羅丹明123線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒

MX3209-100T

100T

390


產(chǎn)品描述

羅丹明123線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(Rhodamine 123 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit)是一種以羅丹明123為熒光探針,快速且靈敏的檢測(cè)細(xì)胞或純化線粒體膜電位變化的試劑盒。因線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。因此本試劑盒可用于早期的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。

羅丹明123(Rhodamine 123,簡(jiǎn)寫:Rh123),一種細(xì)胞膜滲透性的陽(yáng)離子熒光探針,一種線粒體跨膜電位的指示劑。羅丹明123快速穿透細(xì)胞膜,僅需幾分鐘就可以被具有活性的線粒體所俘獲,且對(duì)細(xì)胞沒有任何毒性。激發(fā)波長(zhǎng)為507nm,發(fā)射波長(zhǎng)為529nm。熒光顯微鏡下觀察,呈現(xiàn)黃綠色熒光,也可用熒光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測(cè),通過(guò)熒光信號(hào)的強(qiáng)弱來(lái)判斷線粒體膜電位的變化和凋亡或壞死的發(fā)生。

羅丹明123檢測(cè)線粒體膜電位的原理在于:正常細(xì)胞中,羅丹明1223依賴線粒體跨膜電位(ΔΨm)選擇性進(jìn)入線粒體基質(zhì),可發(fā)出明亮的黃綠色熒光;當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡或壞死,線粒體膜電位喪失,線粒體通透性轉(zhuǎn)化孔持續(xù)開放,引起線粒體膜電位的崩潰,羅丹明123從線粒體中釋放出來(lái),從而導(dǎo)致線粒體內(nèi)黃綠色熒光強(qiáng)度的明顯降低。需注意,有文獻(xiàn)報(bào)道在某些特定情況下,羅丹明123在線粒體內(nèi)過(guò)度聚集后可能出現(xiàn)自淬滅現(xiàn)象,線粒體內(nèi)黃綠色熒光強(qiáng)度降低;而在凋亡發(fā)生時(shí),線粒體中黃綠色熒光增強(qiáng)。


產(chǎn)品包裝

編號(hào)

組分名稱

規(guī)格

保存方法

MX3209-A

羅丹明123染液(1mg/ml)

1ml

-20℃避光,避免反復(fù)凍融

MX3209-B

染色緩沖液(5×)

20ml

-20℃或4℃


保存與運(yùn)輸方法

保存:-20℃避光保存,1年有效。

運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。


注意事項(xiàng)

1) 羅丹明123染液(1mg/ml)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20~25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

2) 本試劑盒僅適用于活細(xì)胞或分離線粒體的檢測(cè),不可用于固定或凍存的細(xì)胞或組織樣本的檢測(cè)。

3) 熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)時(shí)須使用適合熒光檢測(cè)的黑板或白板。

4) 如實(shí)驗(yàn)需要,可選擇CCCP(MX3258)或FCCP(MX3259)用作陽(yáng)性對(duì)照,誘導(dǎo)線粒體膜電位喪失。

5) 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題,請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

6) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


需要自備的儀器和試劑

1) 流式細(xì)胞儀、熒光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡(激發(fā)波長(zhǎng):488-505nm,發(fā)射波長(zhǎng):515-575nm,一般為529nm)。

2)【可選】線粒體提取試劑及其配套儀器   3)1.5ml微量離心管    4)載玻片   5)無(wú)菌雙蒸水


使用方法

1、試劑準(zhǔn)備

于正式實(shí)驗(yàn)前,取適量低溫保存的染色緩沖液(5×)用無(wú)菌雙蒸水稀釋到1×,待用。(比如:1ml染色緩沖液(5×)加入4ml雙蒸水,混勻即可)。


2、細(xì)胞染色及分析

2.1收集培養(yǎng)細(xì)胞調(diào)整其密度為1×106/ml,重懸于培養(yǎng)基中;

2.2加入羅丹明123染液(1mg/ml) 使其濃度為:0.1 - 50 µg/ml(根椐細(xì)胞種類不同而濃度不同,一般染色濃度為3 - 10 µg/ml);

2.3 37℃孵育1 - 30 min(根椐細(xì)胞種類不同而不同,一般染色時(shí)間為10 min);

2.4離心后用培養(yǎng)基洗細(xì)胞兩次;

2.5重懸細(xì)胞于培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)60 min;

2.6根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,選擇合適的儀器檢測(cè):

① 流式細(xì)胞儀檢測(cè):激發(fā)波長(zhǎng)488-505nm,發(fā)射波長(zhǎng)515-575 nm(一般為529nm);

② 熒光顯微鏡觀察:滴加100 µl上述混合液于載玻片上,激發(fā)濾片波長(zhǎng)488nm,發(fā)射波長(zhǎng)為529nm觀察。


3、線粒體染色及分析

3.1按照常規(guī)方法提取線粒體(或根據(jù)商業(yè)化的線粒體提取試劑盒來(lái)操作),之后用適量的1×染色緩沖液重懸線粒體;

3.2按照常規(guī)方法進(jìn)行蛋白含量測(cè)定,之后用1×染色緩沖液調(diào)配成3mg/ml蛋白濃度的線粒體溶液;

3.3取2ml 1×染色緩沖液和1ml線粒體溶液;

3.4加入適量待測(cè)化合物(同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照組),25℃孵育3min;

3.5加入10µl羅丹明123染液;

3.6用熒光光度計(jì)來(lái)檢測(cè):將上述混合液全部加入石英比色皿中,置于25℃測(cè)定,激發(fā)波長(zhǎng)488-505nm,發(fā)射波長(zhǎng)529nm,連續(xù)記錄從0-30min內(nèi)熒光強(qiáng)度的變化。亦可以用熒光酶標(biāo)儀來(lái)檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)為507nm,發(fā)射波長(zhǎng)為529nm;或在軟件中將檢測(cè)對(duì)象設(shè)置為FITC,即可檢測(cè)羅丹明123的信號(hào)。


4、熒光觀測(cè)和結(jié)果分析

羅丹明123的激發(fā)波長(zhǎng)為507nm,發(fā)射波長(zhǎng)為529nm。如使用熒光顯微鏡觀察,可以參考觀察FITC等其它綠色熒光檢測(cè)時(shí)的設(shè)置。黃綠色熒光變?nèi)?,說(shuō)明線粒體膜電位下降,并且該細(xì)胞很可能處于細(xì)胞凋亡早期。通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組測(cè)量的相對(duì)熒光值(Relative fluorescence values, RFU),可得出藥物處理后線粒體內(nèi)羅丹明123熒光強(qiáng)度的變化。此處的陰性對(duì)照組為僅含染色緩沖液未經(jīng)染色的細(xì)胞樣品。



相關(guān)產(chǎn)品

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MX3258-10MG

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10mg

MX3259-10MG

FCCP (Powder)凋亡誘導(dǎo)劑/質(zhì)子載體

10mg

 

羅丹明123線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞增殖羅丹明123線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞增殖

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