細(xì)胞:SW-13細(xì)胞
中文名稱:人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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通過皮膚細(xì)胞中的纖維原細(xì)胞來尋找控制重新編譯過程的基因。
一個(gè)生物體內(nèi)的所有細(xì)胞擁有相同的基因,但細(xì)胞的基因活動(dòng)的形式卻有所不同,這種活動(dòng)形式最終決定了細(xì)胞是成為干細(xì)胞還是分化成成人細(xì)胞兩種不同的路徑。
在克隆干細(xì)胞的過程中,卵細(xì)胞中某些不為人知的因素會(huì)關(guān)閉生成神經(jīng)等細(xì)胞的基因,同時(shí)開啟只有胚胎中表達(dá)的基因。
通過熒光標(biāo)記物來識(shí)別出對(duì)重新編譯過程非常重要的基因,然后直接利用這個(gè)基因來激活成人細(xì)胞,誘導(dǎo)成人細(xì)胞核自己進(jìn)行重新編譯,生成干細(xì)胞系。
重新編譯細(xì)胞的過程可以在實(shí)驗(yàn)室中直接進(jìn)行了,這對(duì)治療性克隆的研究來說將是一個(gè)巨大突破。
一旦掌握了這一過程,就會(huì)創(chuàng)造出其他新的技術(shù),直接將成人細(xì)胞轉(zhuǎn)變成干細(xì)胞,這些技術(shù)將因不再需要生成和破壞人類胚胎而消除人們圍繞克隆干細(xì)胞的倫理爭(zhēng)論;
由于這些技術(shù)不再需要人類卵子的供應(yīng),克隆的效率和運(yùn)用范圍將會(huì)大大提高,再生藥物也將迎來全新的時(shí)代,干細(xì)胞移植也會(huì)適用于任何有所需要的人。
這一科學(xué)設(shè)想的實(shí)現(xiàn)已經(jīng)做了一些初步工作。已經(jīng)在未分化的干細(xì)胞中識(shí)別出一系列非活性基因,一旦被激活,這些基因就會(huì)產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄因子,使干細(xì)胞發(fā)育成不同的成人細(xì)胞。
科研人員還在想方設(shè)法通過基因改變胚胎特性,改變過的基因?qū)⑹古咛ゲ粫?huì)發(fā)育成人類,從而可以避免破壞生命的倫理之爭(zhēng)。
核移植克隆技術(shù)只是必須經(jīng)過的過渡性技術(shù),人類最終會(huì)以此為基礎(chǔ)開發(fā)出更新的技術(shù),使胚胎干細(xì)胞從倫理爭(zhēng)論中解放出來。核移植是目前進(jìn)行重新編譯可以選擇的途徑,而只有不斷認(rèn)識(shí)這一過程,才能找到跨越或取代這一過程的其他選擇。