細(xì)胞：C2C12細(xì)胞
中文名稱：小鼠成肌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；)
分離:理想情況下，一種真正的干細(xì)胞系在體外處理前必須在體內(nèi)環(huán)境下來(lái)鑒別出來(lái)。
但是，目前大多數(shù)分離干細(xì)胞的工作都是在體外模擬環(huán)境中進(jìn)行的。體外分離技術(shù)是建立在對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)記物的識(shí)別基礎(chǔ)上。
已經(jīng)用來(lái)純化干細(xì)胞的標(biāo)記包括CD34、AC133、STRO-1、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)受體p7520等。分離方法包括熒光標(biāo)記細(xì)胞分選、免疫磁分離和免疫吸附柱分離。
最近發(fā)現(xiàn)了一些新奇的細(xì)胞標(biāo)記物陰性的干細(xì)胞，因此有些人對(duì)使用單一細(xì)胞標(biāo)記物來(lái)分離干細(xì)胞提出了一些異議。
例如，細(xì)胞膜上的CD34表達(dá)并不總和干細(xì)胞的活動(dòng)有關(guān)。在小鼠身上有大量靜止的干細(xì)胞系，它們?nèi)狈D34的表達(dá)，但是卻擁有完_全的再建能力。
一種類似的靜止CD34陰性的造血干細(xì)胞也在人體上被發(fā)現(xiàn)。因此，利用某些特定成熟細(xì)胞的表面標(biāo)記物來(lái)去除成熟細(xì)胞而保留干細(xì)胞的方法將會(huì)在未來(lái)占據(jù)更大的優(yōu)勢(shì)。
