細(xì)胞：COS-7細(xì)胞
中文名稱：非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞
生長特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；)
擴(kuò)增
為克服干細(xì)胞數(shù)目少的局限性,研究人員致力于開發(fā)干細(xì)胞體外擴(kuò)增技術(shù).然而,要使干細(xì)胞在長期擴(kuò)增中保持未分化狀態(tài)和多系分化潛能,研究人員尚面臨著巨大挑戰(zhàn)。
含已知細(xì)胞因子和生長因子的無基質(zhì)無血清體外培養(yǎng)物最終目的是應(yīng)用于臨床,而造血細(xì)胞在臨床上有廣泛應(yīng)用前景。目前科學(xué)家已成功開發(fā)體外培養(yǎng)人造血干細(xì)胞(HSC)技術(shù)以獲得大量HSC。
IL-3、干細(xì)胞因子(SCF)和Flt-3配體(FL)具有早期效應(yīng)和細(xì)胞系非特異性造血刺激功能, 因而在干細(xì)胞擴(kuò)增中頗受青睞。但目前為止,還沒有獲得這方面HSC體外擴(kuò)增的確鑿證據(jù)。
在加入FL、TPO(thrombopoietin) 、IL-6 和IL-11條件下,臍血HSC得以程度地?cái)U(kuò)增。PDGF-BB和EGF則使人BMSC程度地?cái)U(kuò)增。神經(jīng)元祖細(xì)胞已從人皮質(zhì)培養(yǎng)物中成功分離,并在EGF和FGF-2條件下擴(kuò)增,200天不到的時(shí)間內(nèi)細(xì)胞數(shù)增加了150萬倍。
過去十年內(nèi)這些體外干細(xì)胞和祖細(xì)胞擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)的開展歸功于重組細(xì)胞因子和細(xì)胞篩選技術(shù)的進(jìn)展,因此,發(fā)現(xiàn)新細(xì)胞因子和已有細(xì)胞因子的新功能可促進(jìn)干細(xì)胞擴(kuò)增研究。另外, 系統(tǒng)性分析生長因子受體的表達(dá)有助于設(shè)計(jì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)的新方法.
