細胞：SiHa細胞
中文名稱：人子宮頸鱗狀癌細胞
生長特性：貼壁細胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間，通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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隨著其它基因變化一起，失活的Pax5驅(qū)動正常血細胞變成白血病細胞，重新復活Pax5能夠使細胞重新開始其正常發(fā)育并丟失那些類似癌癥的特性，有效地治療白血病。吸引我們的是只是回復Pax5就足夠使這些癌細胞恢復常態(tài)化，盡管其它基因是改變的。
白血病中，未成熟白血細胞復制異常并在骨髓中累積，干擾正常血細胞的產(chǎn)生。在兒童B-ALL中Pax5常常是一個‘消失’的基因。Pax5對于一種白血細胞——b細胞正常發(fā)育的，當Pax5功能缺乏抵抗力時，發(fā)育中的B細胞陷入一種不成熟狀態(tài)并且變成癌性的。
證明恢復Pax5功能，即使是在已經(jīng)發(fā)生癌病的細胞中，移除這個‘阻塞’，使得細胞發(fā)育成正常白血細胞。研究揭示了Pax5的功能，是約100種已知‘抑制’人類腫瘤的基因之一。當這些腫瘤抑制基因通過改變DNA而被失活時，腫瘤開始發(fā)育。
這項工作揭示如何鈍化腫瘤抑制基因Pax5促成B-ALL發(fā)育以及白血病細胞如何變成‘熱愛’低Pax5水平以繼續(xù)激增。縱使B-ALL細胞有多種基因突變，只是簡單的復活Pax5引起腫瘤細胞恢復正常發(fā)育并失去它們的癌變性質(zhì)。”
強制B-ALL細胞重新開始它們的正常發(fā)育能夠為治療白血病提供一種新策略。然而B-ALL與其它癌癥相比相對容易預測，目前的治療可以持續(xù)多年而且具有重大副作用。通過了解特殊的基因改變?nèi)绾悟?qū)動B-ALL，有可能產(chǎn)生行動更快且較少有副作用的特異療法。
腫瘤細胞中的基因缺失不是傳統(tǒng)上的藥物靶點。癌癥發(fā)育期間通過開發(fā)藥物恢復丟失基因的功能是非常困難的，然而通過了解Pax5缺失引起白血病的機制，我們就可以開始考慮開發(fā)藥物的方式，能夠像恢復Pax5功能一樣的效果?；蜷_關技術用于學習Pax5也能用于了解其它癌癥中的‘腫瘤抑制’基因。
