細(xì)胞：HepG2細(xì)胞
中文名稱(chēng)：人肝癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀(guān)察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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對(duì)囊性纖維化患者的相同致病菌的治療，在其肺部的一個(gè)區(qū)域可能有效，但在其他區(qū)域可能并非如此。
細(xì)菌在患者肺部的不同區(qū)域被分隔開(kāi)來(lái)，并進(jìn)化出不同的區(qū)域特異性。
研究人員發(fā)現(xiàn)了細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)需求量、宿主防御和抗菌素耐藥性等方面的差異。這些結(jié)果暗示，其他感染也可能產(chǎn)生類(lèi)似的細(xì)菌多樣性。
為了弄清慢性細(xì)菌如何在抗菌素和免疫系統(tǒng)的雙重壓力下仍持續(xù)存在，解剖了通過(guò)肺移植術(shù)從囊性纖維化患者身上移除的肺，并從不同的肺部區(qū)域收集了數(shù)千個(gè)假單胞菌樣本。
該研究小組發(fā)現(xiàn)，雖然所有的假單胞菌都是一個(gè)單一菌株的后代，但每個(gè)肺部區(qū)域包含了大量功能各異的“親屬”假單胞菌。
寄居在不同肺部區(qū)域的細(xì)菌在抗菌素耐藥性和毒性方面的差別非常大。這些差異將影響患者健康。
研究人員分析了這種細(xì)菌的遺傳代碼，DNA序列顯示，這些差異的出現(xiàn)是由于細(xì)菌細(xì)胞被孤立在肺部的不同區(qū)域，然后發(fā)生局部進(jìn)化，就像達(dá)爾文發(fā)現(xiàn)的加拉帕戈斯群島雀鳥(niǎo)的進(jìn)化。
DNA序列還表明，細(xì)菌經(jīng)過(guò)數(shù)年甚至數(shù)十年進(jìn)化出的這些特點(diǎn)，可能持續(xù)存在于細(xì)菌寄居的不同肺部區(qū)域，并能提供有關(guān)過(guò)去條件和治療的“記憶”，以幫助假單胞菌更強(qiáng)壯。
即便當(dāng)單一菌株引發(fā)感染時(shí)，人類(lèi)器官進(jìn)化也能產(chǎn)生不同的相關(guān)細(xì)菌家族。這可能是讓治療十分困難的部分原因，當(dāng)對(duì)一類(lèi)壓力敏感的細(xì)菌被殺死后，功能不同的兄弟細(xì)菌就占據(jù)了它們的地盤(pán)。
