細胞：CMT93細胞
中文名稱：小鼠結腸癌細胞
生長特性：貼壁細胞
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間，通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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采用體內(nèi)注射一氧化氮合酶(NOS)抑制劑zuo旋硝基精氨_酸甲基酯(L-NAME)和在體外培養(yǎng)基中分別加入L-NAME或次huang嘌呤以抑制卵母細胞自發(fā)成熟的3種模型, 研究了一氧化氮(NO)供體硝普_鈉(SNP)對小鼠卵母細胞體內(nèi)、外成熟的促進作用.
結果表明:只有腹腔注射2.5 mg/kg SNP這一劑量組能顯著逆轉10 mg/kg L-NAME對卵母細胞第一極體(PB1)釋放的抑制作用(P < 0.05), 而高劑量SNP (10 mg/kg)使小鼠在注射藥物半小時后全部死亡;
10-7, 10-6和10-5 mol/L濃度的SNP能顯著促進由4 mmol/L次huang嘌呤抑制的卵丘卵母細胞復合體(CEO)中卵母細胞的體外成熟, 而10-3, 10-4, 10-8 mol/L SNP對CEO中卵母細胞的體外成熟無影響;
最適濃度的SNP(10-5和10-6 mol/L)不影響裸卵(DO)的體外成熟;
10-3 mol/L L-NAME能顯著抑制CEO PB1的釋放, 但對生發(fā)泡破裂(GVBD)無影響, 而10-5 mol/L SNP能顯著逆轉其抑制.結果提示, 卵丘細胞產(chǎn)生的生理劑量的NO可以促進體內(nèi)、外卵母細胞的成熟.
