細(xì)胞:HEK293A細(xì)胞
中文名稱:人胚腎細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:MEM+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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將白細(xì)胞反分化成干細(xì)胞
將人體血液中被稱作單核細(xì)胞的白細(xì)胞置于特定的營養(yǎng)劑和生長因子中,促使其反分化為多能干細(xì)胞。
這種反分化而成的干細(xì)胞可以分化為多種組織細(xì)胞,包括腦細(xì)胞、肝細(xì)胞和生產(chǎn)胰島素的貝塔胰島細(xì)胞等,但并非像胚胎干細(xì)胞那樣可以分化為全部的組織細(xì)胞。生長因子的不同組合能使反分化成的干細(xì)胞分化為不同細(xì)胞。
這項(xiàng)技術(shù)的原理是將患者自身的白細(xì)胞還原成干細(xì)胞,然后用化學(xué)方法促使其重新發(fā)展成特定組織,這些組織可用來治愈受損組織。這項(xiàng)技術(shù)的最_大優(yōu)勢在于,移植組織是由患者自身細(xì)胞轉(zhuǎn)變而來的,可從根本上杜絕排異反應(yīng)。
不過,絕大部分主流干細(xì)胞研究人員對此抱懷疑態(tài)度,因?yàn)橄駟魏思?xì)胞這樣的特殊細(xì)胞可以反分化還原出更為原始的干細(xì)胞的概念還不成熟。
但目前多數(shù)干細(xì)胞研究人員都專注于對胚胎干細(xì)胞的研究,忽視了成體細(xì)胞反分化的研究。造成這種現(xiàn)象的原因之一可能是胚胎干細(xì)胞更為“純凈”,而成體細(xì)胞因已受長時(shí)間的遺傳損害,容易出現(xiàn)差錯(cuò)。