細(xì)胞:Hepa1c1c7細(xì)胞
中文名稱:小鼠肝癌細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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胚胎干細(xì)胞存在死亡機制
研究胚胎干細(xì)胞時有驚人發(fā)現(xiàn):這種生物體內(nèi)最_活躍的細(xì)胞群體內(nèi)竟然存在明顯的細(xì)胞凋亡機制。
研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),胚胎干細(xì)胞中大量存在caspase酶,這是一類從內(nèi)部破壞細(xì)胞的蛋白質(zhì)。他們的存在通常被認(rèn)為是一種細(xì)胞自發(fā)性死亡過程(細(xì)胞編程性死亡,或稱細(xì)胞凋亡)存在的標(biāo)志。生物體通常利用這一機制消除受損或多余細(xì)胞。
雖然胚胎干細(xì)胞內(nèi)含有高水平的caspase酶活性,但其中很少細(xì)胞真正進(jìn)入死亡過程。
在驗證研究結(jié)果時,進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)胚胎干細(xì)胞中還存在著另外兩種細(xì)胞自sha的標(biāo)志性因素:PARP-1蛋白,這是一種在自sha細(xì)胞中大量存在的蛋白質(zhì);以及作為細(xì)胞能量工廠的線粒體的去極化,這通常被認(rèn)為是線粒體不再工作的標(biāo)志。
胚胎干細(xì)胞的自我更新過程可能從細(xì)胞死亡過程進(jìn)化而來,兩個過程的某些部分可能相同。