細(xì)胞:HMVEC-L細(xì)胞
中文名稱:人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:MEM+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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胚胎干細(xì)胞分化研究的一些動向
實(shí)驗(yàn)室將人的胚胎干細(xì)胞株H1與小鼠的骨髓來源的細(xì)胞或卵黃來源的細(xì)胞共培養(yǎng), 1-2%分化的H1細(xì)胞表現(xiàn)CD34+,CD38-,這是早期造血干細(xì)胞的表型。
在半固體培養(yǎng)條件下,這些造血祖先細(xì)胞形成紅細(xì)胞和巨核細(xì)胞。人類胚胎干細(xì)胞體外分化為研究人類造血過程提供了基礎(chǔ),也為移植和輸血提供了新的細(xì)胞來源。
研究了胚胎干細(xì)胞H9株體外自發(fā)分化為內(nèi)皮細(xì)胞。
利用血小板內(nèi)皮細(xì)胞吸附分子-1(platelet endothelial cell-adhesion molecule-1,PECAM1)抗體分離胚胎干細(xì)胞來源的內(nèi)皮細(xì)胞,并對這些細(xì)胞的特點(diǎn)進(jìn)行了研究。
當(dāng)把這些細(xì)胞移植入SCID小鼠時,這些細(xì)胞形成微血管并含有小鼠的血細(xì)胞。這些細(xì)胞有可能為組織工程,內(nèi)皮細(xì)胞移植等提供細(xì)胞來源。
科研人員利用肝臟特異性標(biāo)記物證明小鼠胚胎干細(xì)胞在體外可分化為肝細(xì)胞。這一體外肝細(xì)胞分化模型系統(tǒng)可用于研究肝細(xì)胞譜系特化中的特異因子。
此外,在體外應(yīng)用基質(zhì)細(xì)胞來源的誘導(dǎo)活性(stromal cell-derived inducing activity, SDIA)誘導(dǎo)靈長目動物胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)元分化,并產(chǎn)生多巴胺。他們發(fā)現(xiàn)胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)元分化在體外(10天)比在胚胎(5周)快得多。