細(xì)胞:NRK-49F細(xì)胞
中文名稱:大鼠纖維樣腎細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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神經(jīng)干細(xì)胞應(yīng)用中存在的問(wèn)題:
目前建立的神經(jīng)干細(xì)胞系絕大多數(shù)來(lái)源于鼠 ,而鼠與人之間存在著明顯的種屬差異;神經(jīng)干細(xì)胞的來(lái)源不足;
部分移植的神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)展成腦瘤;神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染范圍的非選擇性表達(dá)及轉(zhuǎn)染基因表達(dá)的原位調(diào)節(jié) ;利用胚胎干細(xì)胞代替神經(jīng)干細(xì)胞存在著社會(huì)學(xué)及倫理學(xué)方面的問(wèn)題等。(HKC胚腎上皮細(xì)胞 種屬:人)
目前神經(jīng)干細(xì)胞的來(lái)源、分離、培養(yǎng)及鑒定還有許多工作要做 ,神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)、分化及遷移機(jī)制有待進(jìn)一步研究。(Jurkat D,E淋巴瘤細(xì)胞 種屬:人)
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及基因組的研究 ,如DNA微列陣技術(shù) ,進(jìn)一步明確成體神經(jīng)干細(xì)胞的確切位置 ,可以設(shè)計(jì)藥物特異性地激活這些細(xì)胞。(Jurkat D,E淋巴瘤細(xì)胞 種屬:人)
進(jìn)一步認(rèn)識(shí)神經(jīng)干細(xì)胞的本質(zhì)和控制分化基因 ,通過(guò)調(diào)控靶基因 ,可以從神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生特定的分化細(xì)胞來(lái)滿足各種需要。(KB口腔表皮樣癌細(xì)胞 種屬:人)
橫向分化的發(fā)現(xiàn)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的研究和應(yīng)用具有重要意義 ,人們可望從自體中分離誘導(dǎo)出神經(jīng)干細(xì)胞 ,有可能解決神經(jīng)干細(xì)胞的來(lái)源問(wèn)題??傊?,神經(jīng)干細(xì)胞的應(yīng)用將有廣闊的前景。